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姜黄素及非甾体类抗炎药抗胰腺癌的实验研究

宫爱霞  
【摘要】:胰腺癌是恶性度很高的消化道肿瘤,近40年发病率呈稳步上升趋势, 5年生存率仅为1-4%,发病率与死亡率几乎一致。目前缺乏有效的临床治疗手段。 对于很多实质性肿瘤,包括胰腺癌,基于预防目地的努力较之对肿瘤的治疗收效更大。因此,探索有效的化学预防手段对降低胰腺癌的发病率及死亡率极其重要。 化学预防是指化学药物或天然药物对致癌过程的预防、抑制、中断、或逆转。非甾体类抗炎药(nonsteroidal antiinflammatory drug,NSAIDs ) 除了具有抗炎、解热、镇痛和抗血小板聚集作用外,尚有抗肿瘤增殖和诱导肿瘤细胞凋亡的作用,这些药物对消化道肿瘤的化学预防作用已被许多研究证实,但对胰腺癌的防治作用,目前知之甚少,而且结论尚不统一。姜黄素(Curcumin,Cur)是一种从姜科植物姜黄中提取的酚性色素,具有一定的非甾体类抗炎药的特性,现已证明其有强烈的抗氧化、抗突变和抗癌作用;目前对其抗癌作用的研究主要集中在肿瘤化学预防方面,美国国立肿瘤所已将其列为第3代癌化学预防药。 本文的研究目的旨在观察比较姜黄素、非选择性和选择性非甾体类抗炎药对胰腺癌的体外抑制作用,探讨姜黄素和非甾体类抗炎药联合应用是否有协同作用、姜黄素能否减少非甾体类抗炎药的用量,从而降低非甾体类抗炎药的不良反应;并对姜黄素、非甾体类抗炎药抗肿瘤的分子机制作了初步探讨。主要结果如下: 第一篇 胰腺癌组织中环氧合酶–2、Survivin的表达及意义 1. 目的:探讨环氧合酶–2(cyclooxygenase-2,COX-2)、Survivin在人胰腺癌组织中表达情况及与胰腺癌的关系。 2.方法:石蜡包埋的胰腺癌组织48例,慢性胰腺炎组织10例,正常胰腺组织5例,全部病例术前均未做化疗和放疗。应用EliVisionTMPlus法行免疫组织化学染色,分别用兔血清和0.01MPBS代替一抗,以确定其特异性和可靠性。根据胞浆或胞核的染色强度和染色细胞比例,结果用阴性、弱阳性、阳性、强阳性表示。应用SPSS10.0软件进行秩和检验。P0.05有统计学意义。 WP=6 3. 结果:胰腺癌组织中COX-2的阳性表达率(83.33%)明显高于慢性胰腺炎组织(30%),正常胰腺无表达。慢性胰腺炎和正常胰腺组相比,两者之间无显著差异(Z=-1.316, p=0.1880.05),胰腺癌与慢性胰腺炎相比,差异有显著性(Z=-3.647, p=0.0000.01),胰腺癌与正常胰腺组相比,差异有显著性(Z=-3.217, p=0.01);Survivin只在胰腺癌组织中表达,阳性表达率56.25%,慢性胰腺炎和正常胰腺组织无表达。胰腺癌组织与正常胰腺组织相比,二者之间差异有显差性(Z=-2.215, p=0.0270.05),胰腺癌组织与慢性胰腺炎组织相比,二者之间差异有显差性(Z=-3.050 p=0.020.05)。从组织学分型看,高分化和低分化腺癌之间,无显著性差异(Z=-1.237 p=0.2160.05);COX-2表达与Survivin表达具有协同性。卡方检验发现COX-2表达和Survivin表达无显著性差异(X2=2.438, p=0.1180.05)。表明COX-2 高表达时,Survivin也存在高表达。 4. 结论:COX-2在人胰腺癌组织中的表达率明显高于慢性胰腺炎及正常胰腺组织,并且以过表达为主;慢性胰腺炎有少量表达,以低表达为主,说明COX-2参与了胰腺癌的发生及发展过程,同时也表明,慢性炎症刺激也可诱导COX-2表达,推测在慢性胰腺炎中的COX-2表达,可能是促使慢性胰腺炎转化为胰腺癌的因素之一;Survivin选择性地表达于胰腺癌组织,提示Survivin也参与了胰腺癌的发生及发展过程;胰腺癌中COX-2和Survivin含量经常上调并共同表达,COX-2表达增高时确实存在Survivin的表达失衡,这种表达失衡有可能在胰腺癌发生、发展中起一定作用。 第二篇 环氧合酶2、Survivin在人胰腺癌细胞株的表达 1. 目的:探讨环氧合酶2、Survivin在人胰腺癌细胞株的表达情况。 2. 方法:以人胰腺癌细胞株PAN02为实验对象,用免疫细胞化学法、蛋白质免疫斑点印迹法检测COX-2和Survivin蛋白质水平的表达,用RT-PCR法检测COX-2和Survivin mRNA水平的表达。 3. 结果:免疫细胞化学染色显示,COX-2、Survivin蛋白在人胰腺癌细胞株PAN02中均有表达,COX-2蛋白主要位于细胞浆和核膜上,Survivin蛋白主要位于细胞核。蛋白免疫斑点印迹也显示PAN02细胞株中有COX-2和Survivin蛋白表达;RT-PCR显示,PAN02细胞株中能看到对应COX-2mRNA的485 bp和对应Survivin mRNA的449 bp的PCR产物,证实COX-2、Survivin mRNA在人胰腺癌细胞株PAN02中表达。 4. 结论:COX-2、Survivin无论是mRNA水平还是蛋白质水平在胰腺癌细胞株中均有表达,进一步验证了COX-2在胰腺癌的发生发展中扮演着重要角色,同时也证实了COX-2和Survivin在胰腺癌细胞株中共表达,推测这种凋亡抑制蛋白的表达失衡与COX-2共同促进了胰腺癌的发生。 WP=7 第三篇 姜黄素联合非甾体类抗炎药对胰腺癌细胞增殖的抑制作用 1. 目的:研究不同药物对胰腺癌细胞增殖的体外抑制作用,探讨姜黄素与非甾体类抗炎药之间是否有药物协同作用,姜黄素干预下能否减少非甾体类抗炎药的药物剂量。 2. 方法:以人胰腺癌细胞株PAN02为实验对象,以姜黄素、阿司匹林、尼美舒利为实验材料。将药物分为姜黄素、阿司匹林、尼美舒利、姜黄素+阿司匹林及姜黄素+尼美舒利5组,采用MTT法观察药物作用后对PAN02胰腺癌细胞株的体外增长抑制作用。应用SPSS10.0统计?


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