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转化生长因子β_1通过Smad2途径调节足细胞结缔组织生长因子的表达

梁燕  
【摘要】:目的:(1)观察肾小球足细胞上结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)的表达,以及转化生长因子?1(Transforming growth factor ?1,TGF?1)、血小板生长因子(Platelet derived growth factor,PDGF)和血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)对CTGF表达的影响。 (2)探讨TGF?1刺激足细胞CTGF表达可能的信号途径。 方法:(1)体外培养的小鼠足细胞分别用TGF?1、PDGF和AngⅡ刺激,以蛋白印迹分析(Western Blot)、反转录-聚合酶链反应(Reverse transcript-polymerase chain reaction,RT-PCR)和细胞化学免疫荧光技术分别检测不同刺激因子对CTGF 蛋白和(或)mRNA表达的影响。用不加刺激物的足细胞作对照。 (2)以不同浓度的TGF?1刺激足细胞12h,或1ng/ml TGF?1刺激足细胞不同时间,Western Blot分别检测TGF?1刺激Smad2和细胞外信号调节激酶 (Extracelluar regulated protein kinase 1/2,ERK1/2)活化的剂量依赖曲线和时间依赖曲线。用不加刺激物的足细胞作对照。 (3)用丝/苏氨酸激酶抑制剂Staurosporine和ERK1/2活化抑制剂PD98059分别阻断Smad2和ERK1/2的活化,探讨TGF?1调节CTGF表达的可能信号传导途径。 WP=5 细胞分为不加刺激的对照组、单独TGF?1刺激组、单独阻断剂处理组和阻断剂预处理后TGF?1刺激组。用Western Blot分别检测Smad2、ERK1/2途径的活化和CTGF蛋白的表达水平。 结果:(1)TGFβ1可显著上调足细胞CTGF蛋白的表达,而PDGF和AngⅡ对其表达没有影响。 (2)TGFβ1可以上调足细胞CTGF mRNA的表达。 (3)TGFβ1可以活化Smad2和ERK1/2途径,不能活化p38途径,而在足细胞上未能检测到JNK蛋白的表达。 (4)Staurosporine和PD98059能分别阻断Smad2和ERK1/2的磷酸化(活化)。 (5)阻断Smad2途径能消减TGFβ1对CTGF蛋白的上调作用,而阻断ERK1/2途径没有达到此效果。 结论:(1)TGFβ1能显著刺激足细胞CTGF的表达,而公认的促纤维化因子PDGF和AngⅡ不能。 (2)TGFβ1刺激足细胞表达CTGF的作用可能是通过活化Smad2途径介导的,而与ERK1/2途径的活化无关,后者可能参与介导了TGFβ1在足细胞上的其它生物学效应。


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