收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

脐血造血干/祖细胞体外扩增及无血清培养的实验研究

鲍春雨  
【摘要】:目的:作为造血干细胞的新来源,脐血以其独特的优势已广泛应用于移植治疗、生物免疫治疗、基因治疗等领域。但由于单份脐血的采集量低,不足以满足成人移植的需要,长期以来,研究者们一直在探索脐血干/祖细胞的有效分离、扩增的方法。本课题旨在寻求一种简便、高效、实用的脐血干/祖细胞的分离方法,并且对分离后的细胞进行体外扩增,来考察分离后的脐血干/祖细胞的增殖能力,探索扩增后最佳的应用时机;同时,比较有血清与无血清方法体外扩增脐血干/祖细胞的异同,探究无血清方法临床应用的可能性。 方法:体外分离并培养脐血单个核细胞(MNC),计数MNC总数、流式细胞仪检测CD34+细胞含量、混合集落生成单位(CFU-mix)培养观察集落形成能力,验证脐血干/祖细胞分离和扩增的效果。 1.将自行配制的比重为1.064g/L的蔗聚糖-泛影葡胺(Ficoll-hypaque)分离液与传统的比重为1.077g/L淋巴细胞分离液密度梯度分离脐血,检测上述指标,比较分离效果;2.用上述两种分离液分离的脐血MNC进行添加细胞因子(IL-3、SCF、GM-CSF)的为期三周的体外扩增,并对扩增后的细胞进行上述指标的检测,观察每周脐血干/祖细胞的增殖、分化情况。3.采用比重为1.064g/L的分离液分离的脐血MNC,用无血清造血干细胞培养体系和传统的含马血清的培养体系,进行三周的体外扩增,检测上述指标,比较二者扩增效果。 结果:1.1.064g/L组的CD34+细胞数、CFU-mix产率分别比1.077g/L WP=5 组高3.7倍和1.6倍,说明比重1.064g/L的分离液分离的脐血所含造血干/祖细胞含量高、细胞增殖能力强。1.064g/L组MNC数是1.077g/L组的0.6倍,说明1.064g/L组的分离液有较高的干/祖细胞回收率。2.在细胞因子IL-3、SCF、GM-CSF的联合作用下,扩增第二周时,1.064g/L组的MNC数、CD34+数分别扩增了58倍、26倍;1.077g/L组MNC数、CD34+数分别扩增了27倍、23倍,两组细胞均在扩增第二周时细胞增殖能力最强。在扩增第二周时,比重1.064g/L组扩增的MNC数、CD34+数、CFU-mix总数分别是比重1.077g/L组的2.2倍、4.2倍、1.7倍,均有显著差异(P0.05)。可见1.064g/L组扩增效果明显优于1.077g/L组。3.无血清培养体系与添加血清培养体系的的扩增效果在第二周时最好,MNC数、CD34+数无血清组分别扩增了55倍、25.8倍,有血清组分别扩增了58倍、26倍,两者无明显差异(P0.05)。说明使用无血清体系和有血清体系进行扩增的效果相似。 结论:比重为1.064g/L的Ficoll—hypaque分离干/祖细胞效果优于比重1.077g/L的Ficoll—hypaque分离效果,单位体积干/祖细胞含量高,细胞增殖、扩增能力强,为脐血基础和临床研究提供了一种简单、高效的方法。脐血扩增第二周时细胞增殖能力最强、CD34+细胞总数最多,是最佳的应用时机。无血清培养脐血造血干/祖细胞具有临床应用可行性,值得推广。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 于载泺;积极开展脐血及外周血造血干细胞移植的临床与实验研究[J];中华儿科杂志;1997年05期
2 许光正,王仁静,林振武;正常足月新生儿脐血IgA值[J];医学临床研究;1989年04期
3 许瑞英,沈柏均,刘晓燕;脐血T淋巴细胞亚群的研究[J];上海免疫学杂志;1994年05期
4 孙志新,恽寿全,刘峰,范秀茹,李晓炜;西宁地区新生儿脐血血象等参数的测定及分析[J];青海医药杂志;1994年01期
5 朱丽影,张瑞云,姜秀范,张宝和;脐血LAK细胞治疗慢性乙型肝炎的探讨[J];黑龙江医学;1996年10期
6 彭宣宪,高静,黄雪芳,林小刚;脐血免疫复合物的检测及其意义[J];中国公共卫生学报;1997年03期
7 屠云,王琳;脐血干细胞移植治疗白血病的观察及护理[J];黑龙江护理杂志;1997年06期
8 李玛琳,魏彩霞,杨绵本;脐血造血干细胞移植成人的研究[J];中国实验血液学杂志;1997年02期
9 屠云;脐血干细胞移植GVHD的观察及护理[J];现代中西医结合杂志;1998年03期
10 曾鸿毅;脐血采集和输注在我院的开展[J];右江民族医学院学报;1998年01期
11 罗志云,刘维飞,方建培,陈敏;两种脐血采集方法对新生儿的影响[J];南方护理学报;1999年04期
12 杨爱玲,申临渊,贺德志;成人血和脐血输血反应的对比观察[J];中国实用内科杂志;2000年05期
13 何秉燕,陈冬珍,张渝侯,许家琪,刘茜;重组人肿瘤坏死因子协同脐血CD_3AK细胞诱导K562细胞凋亡的实验研究[J];中华血液学杂志;2002年02期
14 王晓波,高强,宋振岚;IL-2,TNFα激活的脐血单核细胞对K562细胞株杀伤作用的研究[J];中国实验诊断学;2003年01期
15 黎阳,包蓉,黄绍良,吴燕峰,魏菁,周敦华;诱导脐血单个核细胞分化为树突状细胞的实验研究[J];中国当代儿科杂志;2004年05期
16 龚梁,陈智;应用脐血造血干细胞治疗艾滋病的研究进展[J];国外医学.流行病学.传染病学分册;2005年02期
17 黄飞,郭纯,王金声,姜晓南,褚西秦,李东辉;妊娠、分娩母血脐血血清骨钙素含量测定及分析[J];武警医学;1994年02期
18 甘承文,刘国卿,吴祥富,张玲;脐带血的采集处理和临床应用[J];武警医学;1995年05期
19 孙莉,罗朝东;人类造血干细胞的胚胎发育及脐血造血干细胞的研究进展[J];解剖科学进展;1996年02期
20 张瑞云,朱丽影,王汉勋,纪淑云,冯涛,姚玉红,郭淑琴,刘润秋;脐血LAK细胞治疗慢性乙型肝炎的临床研究[J];铁道医学;1996年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李廷玉;张萱;陈立;魏小平;瞿平;刘友学;陈洁;;出生时抗氧化维生素与重金属对2岁幼儿智力发育的交互作用[A];中国营养学会妇幼营养第七次全国学术会议论文汇编[C];2010年
2 展富琴;冯建国;计雪强;冯星;丁云芳;;关于健康新生儿脐血胆汁酸正常值的探讨[A];’96全国优生科学大会大会学术讲演与大会论文摘要汇编[C];1996年
3 杨晓凤;王红梅;林慧丽;;脐血CIK细胞治疗肿瘤性疾病的临床研究[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
4 刘斌;廖灿;辜少玲;陈劲松;许遵鹏;吴韶清;钟惠珠;;冻存脐血中血小板、血小板微粒的变化及它们与CD_(34)~+细胞粘附分子表达的关系[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
5 杨晓凤;王红梅;林慧丽;;脐血CIK细胞治疗肿瘤性疾病的临床研究[A];第三届全国血液免疫学学术大会论文集[C];2003年
6 徐智睿;王景银;;子痫前期患者母血、胎盘和脐血中脂蛋白(a)水平的研究[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年
7 王群华;凌斌;赵卫东;祝怀平;陈纲;陈柯;胡文;朱园园;陈敏;;人蜕膜与脐血单个核细胞联合移植建立NOD-SCID鼠EM模型[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年
8 吴楠;陈嘉榆;黄振倩;巫进明;曹履先;胡龙虎;周晋;;HLA不全相合无血缘关系脐血移植治疗急性白血病[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
9 汤雪薇;廖灿;谢杏梅;黄以宁;李焱;吴洁莹;;脐血的HLA B~*15位点血清学与基因分型的比较研究[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
10 谢梅林;吴银根;顾振纶;;脐血嗜碱粒细胞表达HLA-Ⅱ类分子的研究[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集(第二部分)[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 黄景玲;脐血间充质干细胞修复心肌的研究和干细胞临床应用[D];兰州大学;2010年
2 沈建良;脐血树突状细胞体外诱导抗白血病细胞毒效应[D];军医进修学院;2001年
3 李长东;人胎盘间充质干细胞的分离鉴定及其对脐血造血干/祖细胞体外扩增的支持作用[D];吉林大学;2004年
4 赵书平;PSC3445细胞——人脐血中一种新的成体干细胞[D];第二军医大学;2004年
5 安淑华;MDR1基因在白血病化疗中疗效及骨髓保护的研究[D];重庆医科大学;2002年
6 田新;脐血及脐带静脉内皮下间充质干细胞的分离扩增与分化[D];四川大学;2007年
7 谢松涛;内皮祖细胞促进组织工程复合皮和皮瓣缺血组织再血管化的研究[D];第四军医大学;2005年
8 李奇灵;腹水来源的外来体用于卵巢癌免疫治疗的实验研究[D];第四军医大学;2006年
9 刘海英;人脐血间充质干细胞移植对大鼠中枢神经系统损伤的影响研究[D];河北医科大学;2006年
10 周莉;TRAIL内皮祖细胞导向对人卵巢上皮性癌治疗初探[D];复旦大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 蔡永国;F68及其联合DMSO对脐血造血细胞低温保护作用的研究[D];第三军医大学;2002年
2 徐建萍;脐血造血干细胞体外分化为内皮细胞的实验研究[D];福建医科大学;2004年
3 费小明;脐血造血干细胞的体外扩增[D];南京医科大学;2003年
4 袁华魏;脐血单个核细胞扩增前后的骨髓基质植入能力及条件研究[D];大连医科大学;2004年
5 刘宁;脐血丙二醛与胎儿晚期缺氧关系的临床研究[D];天津医科大学;2002年
6 陈小青;妊娠期糖尿病脐血脂联素水平及相关性因素的研究分析[D];南昌大学;2010年
7 蔡伟波;低剂量辐射对脐血的刺激效应及其临床意义研究[D];苏州大学;2001年
8 杨文钰;孕妇及其脐血促红细胞生成素水平及钙、磷的相关性研究[D];天津医科大学;2003年
9 殷虹;凋亡肿瘤细胞负载的脐血树突状细胞体外诱导抗卵巢癌免疫反应[D];苏州大学;2004年
10 程瑞芳;来源于脐血与骨髓中间充质干细胞和造血干细胞的比较[D];天津医科大学;2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 时苏建;脐血托起顺顺生命希望[N];菏泽日报;2010年
2 南方日报记者 曹斯 陈枫 实习生 黄雅君 通讯员 李岩 葛峰 统筹 梅志清;私库脐血转公 可造福更多人[N];南方日报;2010年
3 本报记者 王照重;青岛大学医学院附属医院涉嫌非法采集脐血[N];中国消费者报;2010年
4 曹桂君 记者 姜野;我市培养成功首例脐血染色体[N];朝阳日报;2009年
5 记者 罗昆娅;1.5万元可存“救命”干细胞[N];昆明日报;2010年
6 林湘艳;高龄孕妇最好做个脐血检查[N];大众卫生报;2009年
7 记者 熊学莉 通讯员 吴刘佳 张晨光;脐血基质细胞可辅助重建造血功能[N];健康报;2011年
8 本报记者 王君平;“生命银行”是不是虚假宣传?[N];人民日报;2009年
9 记者 茆琛;祖孙“联合” 产妇“重生”[N];新华每日电讯;2009年
10 记者 时苏建;我市首例采集脐血救治白血病患儿配型成功[N];菏泽日报;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978