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H_(TA)-HSP70_(BCG)冲激的小鼠骨髓树突状细胞的生物学活性变化及分析

崔向丽  
【摘要】:树突状细胞(dendritic cells,DC)在体内抗原提呈方面起重要作用。树突状细胞分化发育过程中存在2个不同阶段,未成熟的DC具有摄取、处理抗原的能力,一旦发育为成熟DC,抗原捕获能力减弱,却变成刺激静息淋巴细胞、激活初次免疫应答的抗原提呈细胞。抗原多肽与HSP70 C末端(HSP70359-610)相联通过CD40诱导DC的成熟,并刺激DC合成IL-12、TNF-α、NO、C-C趋化因子等,从而抑制肿瘤细胞生长。本研究室分别制备榄香烯复合瘤苗抗原(HTA)与卡介苗HSP70(HSP70BCG),构建HTA-HSP70BCG复合物,免疫小鼠后对HTA的攻击具有明显的保护效应。 目的:本实验利用HTA-HSP70BCG复合瘤苗体外冲激(Pulse)小鼠骨髓DC,观察DC的抗原捕获能力、抗原提呈功能等变化。分析探讨HTA-HSP70BCG体外冲激对DC生物学活性的影响及可能机制。 方法:无菌取小鼠胫骨和股骨,用PBS冲洗髓腔,用含有 GM-CSF和IL-4(10ng/ml)的RPMI-1640培养基培养,诱导DC生成,第六天收集不贴壁细胞。然后用HTA、HSP70BCG、HTA-HSP70BCG分别刺激2天,收集DC及其培养上清,分别用ELISA法和一氧化氮(NO)硝酸还原酶法测上清中IL-12和NO的浓度。用流式细胞仪测内吞FITC标记的dextran的DC的百分率。用MTT法检测不同冲激的DC刺激脾脏不粘附细胞的增殖指数、DC对HCa-F增殖的抑制率及活化的脾脏不粘 WP=5 附细胞对HCa-F的杀伤活性。 结果: 1.不同冲激的DC摄取FITC-Dextran的百分率:对照组(未冲激)DC对FITC-Dextran的摄取率为96.77%,HTA组为69.89%,HSP70BCG组为63.89%,HTA-HSP70BCG组为61.05%。除了HSP70BCG组与HTA-HSP70BCG组之间无显著差异(P0.05),其他各组之间均有显著性差异(P0.05)。对照组DC摄取率明显高于冲激组,而以HTA-HSP70BCG冲激组DC摄取率最低。 2.不同冲激的DC对HCa-F的生长增殖抑制作用:按照效靶比1:1,5:;1,10:1,抑制率结果是:对照组DC组HTA组HSP70BCG组HTA-HSP70BCG组。各组之间差异性显著(P0.05),HTA-HSP70BCG冲激组DC的抑制作用最强。 3.不同冲激的DC对脾不粘附细胞的激活作用:对照组DC刺激不粘附细胞的增殖指数是1.15±0.021, HTA组为1.33±0.129, HSP70BCG组为1.42±0.032, HTA-HSP70BCG组为2.35±0.120。各组DC都具有刺激脾不粘附细胞增殖的能力,冲激组增殖指数明显高于对照组DC(P0.05),而以HTA-HSP70BCG冲激组DC刺激能力最强,约为对照组DC的2倍。 4.活化的脾不粘附细胞对活化HCa-F的杀伤率:按照效靶比1:1,10:1,20:1,对照组DC组HTA组HSP70BCG组HTA-HSP70BCG组,冲激组DC活化的脾不粘附细胞对HCa-F的杀伤率明显高于对照组DC组(P0.05)。而以HTA-HSP70BCG组杀伤率最高。 5.不同冲激的DC培养上清液中NO的浓度(umol/L):对照组DC组为44.44±8.779, HTA组为377.84±17.46, HSP70BCG组为433.33±23.937, HTA-HSP70BCG组为544.45±45.016。各组之间差异显著(P0.05),冲激组的NO浓度明显高于对照组DC组,而以HTA-HSP70BCG组NO浓度最高,约为对照组DC的12倍。 6.同冲激的DC培养上清液中IL-12的浓度(pg/ml):对照组DC组为7.892±2.404,HTA组为25.90±5.176, HSP70BCG组为31.03±7.149, HTA-HSP70BCG组为287.92±26.115。各组之间差异显著(P0.05),冲 WP=6 激组的IL-12浓度明显高于对照组DC组,而以HTA-HSP70BCG组IL-12浓度最高,为对照组DC的36倍。 结论:本实验结果表明HTA-HSP70BCG及单独HTA、HSP70BCG 均能促进小鼠骨髓DC的成熟,并且冲激后的DC可以刺激脾不粘附细胞的活化与增殖,活化后的脾不粘附细胞可以杀伤HCa-F细胞。刺激成熟的DC培养上清中IL-12和NO浓度明显高于对照组DC的培养上清,二者可以抑制HCa-F的增殖,NO具有细胞毒活性,可以杀伤HCa-F细胞,因此HTA-HSP70BCG冲激的DC有可能成为有效的肿瘤疫苗。


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