候选抑癌基因Fez1在肺癌中的表达

【摘要】：目的:肺癌目前是世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤,严重影响人类健康,但其癌变机制仍不很清楚。近年来,随着肿瘤分子生物学的深入研究,发现大多数人体恶性实体肿瘤组织DNA出现癌基因的活化、抑癌基因的失活遗传物质变异。正常细胞的癌变是多因素、多阶段及多基因作用的结果。而抑癌基因一般为隐性基因,要在一对等位基因都丢失或失活后,它们的作用才能被发现。一旦失活,可能使癌基因失去控制,过度表达,导致癌变。因此抑癌基因的失活在多种癌变过程中起着重要的作用。抑癌基因的失活可由等位基因丢失,染色体重排,点突变和异常甲基化等引发。 8p的LOH是肺癌发生发展过程中的早期事件,也是肺癌发生过程中的常见的遗传事件,8p的缺失是多种肿瘤发生发展中重要的遗传学改变。人们一直期望如同在3p的缺失区域发现FHIT基因,在9p的缺失中找到p16基因,在17p的缺失中锁定p53基因那样,在8p发现重要的侯选抑癌基因。然而迄今为止在8p中一直没有发现公认的在多种肿瘤中发挥作用的抑癌基因,这和8p在多种肿瘤中的高频缺失的现象是不吻合的。我们在对8p22区域的LOH进行分析时注意到Fez1(F37/Esophageal cancer-related gene-coding leucine-zipper motif,F37/食管癌相关基因编码亮氨酸拉链基因序列,简称FEZ1/LZTS1)基因——一个候选的抑癌基因。本实验以临床肺癌组织标本及相应的远端正常肺组织为对象,探讨与候选抑癌基因Fez1紧密连锁的2个微卫星多态位点的缺失率及其在肺癌中的表达及其与临床 WP=5 病理因素的关系。 方法:实验分为三部分:(1)选取与候选抑癌基因Fez1紧密连锁的微卫星多态位点D8S261和D8S233,然后对32例肺腺癌组织进行两个位点的杂合性缺失(LOH)分析。(2)对32例肺腺癌组织及其相应的远端正常肺组织利用S-P法进行免疫组化分析。(3)选取另外10例肺癌组织标本及相应的正常肺组织,用Western blot检测Fez1表达的差异。 结果:对候选抑癌基因Fez1紧密连锁的两个位点D8S261和D8S233进行LOH分析,结果表明:两个位点D8S261和D8S233的杂合率分别为64.52%(20/31)和46.88%(5/32),LOH阳性率分别为60.0%(11/18)和61.0%(9/15)。免疫组化分析显示Fez1蛋白在正常的支气管上皮中100%表达,在27例有效检测病例中,肺腺癌阳性表达率为33.33%,下调表达的病例占66.67%。Western blot 检测结果显示在肿瘤组织中Fez1表达明显低于正常组织。 结论: 1.32例肺腺癌的8p微卫星多态性标记的LOH频率表明所检测位点中D8S261的LOH发生频率与肺腺癌分期正相关(P0.05)。 2.Fez1在正常肺组织和癌旁支气管上皮细胞中正常表达,在肿瘤组织中的下调表达率达66.67%,其与肺腺癌的病理分级、临床分期无相关性(p0.05)。在混合性的气管腺中,在浆液性腺泡中正常表达,在黏液性腺泡中不表达。 3.Western blot检测观察,结果表明Fez1在肺癌和远端正常组织中的表达存在差异。 4.肺腺癌组织中Fez1蛋白的丢失是频发事件,Fez1可能是肺腺癌发生过程中重要的候选抑癌基因,LOH是其失活机制之一,可能还存在LOH以外的其它失活机制。