收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

对一种源于蜗牛的壳聚糖水解酶的纯化和定性

苏莉  
【摘要】:几丁质是自然界中产量仅次于纤维素的第二大类多糖物质。几丁质及其脱乙酰基产物壳聚糖在水溶液中的溶解度较低,而壳聚糖的低聚物壳寡糖在水溶液中具有较高的溶解度,容易被生物体吸收和利用,在食品工业、农业、医疗等方面有着广泛的应用价值。 比较目前对壳聚糖的氧化降解、酸降解、酶法降解、物理降解等多种水解手段,酶法降解因其具有环境污染小、副产物少、具体操作相对简便等优点而成为产业化的首选。软体动物蜗牛消化道中含有降解多种多糖的水解酶,因此我们选定将蜗牛酶作为对象,分离纯化出活性最强的壳聚糖内切酶,为用分子生物学的方法大量制备该酶做前期准备。 本论文从建立蜗牛壳聚糖内切酶活性检测手段入手,研究了影响酶活性的一系列因素,同时对现有的实验方法进行了比较,确定了纯化的最佳条件,设计出一套可行的实验方案,对蜗牛酶进行了纯化,获得了以下结果: 1.考察了蜗牛酶活性检测方法,最终选择对羟基苯甲酸酰肼(p-hydroxybenzonic acide hydrazidde, PAHBAH)还原糖测定方法作为酶活性的测定方法。 2.为了选择酶蛋白纯化的方法,本实验比较了几种常用的蛋白质纯化方法:1)硫酸铵盐析可以处理大量蛋白质,但对目标酶蛋白纯化效果不佳。2)DEAE-Sepharose离子交换层析、凝胶过滤、疏水作用层析、羟基磷灰石层析对蜗牛酶均有较好的分离效果。羟基磷灰石层析结果 WP=5 显示目标酶是中性或酸性蛋白质。 3.在对各种层析方法实际效果进行分析的基础上,设计出一套较为合理而有效的纯化蜗牛酶的方案。首选采用疏水作用层析,收集酶活性组分用DEAE-Sepharose离子交换层析进行第二步分离,活性高组分经Sephacryl S-300凝胶过滤分离,同时用电泳检测分离纯化的效果。SDS-PAGE上用银染的方法呈单一蛋白质条带。比活性增高了33.333倍。纯化倍数为18.272。得率为0.15。 4.根据SDS-PAGE测得壳聚糖酶的分子量为100KD,其等电点pI为5.45,米氏常数Km为0.154mmol/L,最大反应速度Vmax为0.305umol/L.h。产物聚合度较大。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 王艳,周培根,俞剑,王平平,戚晓玉,陶圣诞;产壳聚糖酶菌株选育及培养条件优化[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2005年02期
2 戴芸,朱旭芬;微生物壳聚糖酶的研究概况[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2004年02期
3 邱乐泉,楼坚,潘加林;壳聚糖酶产生菌的筛选、鉴定及其产酶条件优化[J];浙江工业大学学报;2005年02期
4 逄玉娟,韩宝芹,刘万顺,杨菊林;高产壳聚糖酶菌株的筛选和发酵产酶条件研究[J];中国海洋大学学报(自然科学版);2005年02期
5 王艳,周培根,俞剑,王平平,戚晓玉,陶圣诞;产壳聚糖酶菌株的生物学特性及抑菌性能研究[J];生物技术;2004年05期
6 张虎,赵玉清,范圣第,杜昱光,虞星炬;壳聚糖酶的研究进展[J];化学通报;1999年05期
7 王艳,周培根,王平平,戚晓玉,陶圣诞,杨辉;假单胞菌Y8产壳聚糖酶的培养条件[J];食品与生物技术;2004年05期
8 王钦宏,蔡静平;壳聚糖酶生产菌的筛选、鉴定及其产酶培养条件的研究[J];工业微生物;2000年04期
9 丁基喆,姜泰兴,李载昌;真菌源壳聚糖酶的纯化及其特征(英文)[J];华中农业大学学报;2004年01期
10 王艳,周培根,王平平,戚晓玉,林丽旋,罗一岚;产壳聚糖酶菌株的初步筛选[J];中国微生态学杂志;2003年05期
11 王艳,周培根,俞剑,王平平,戚晓玉,陶圣诞;假单胞菌产壳聚糖酶突变菌株的筛选[J];中国海洋药物;2004年05期
12 郑连英,隋斯光;产壳聚糖酶菌株的诱变育种及其产酶条件研究[J];浙江大学学报(工学版);2004年08期
13 方祥年,杜昱光,黄秀梨,洪泂;球孢白僵菌高壳聚糖酶突变株的筛选[J];微生物学通报;2001年03期
14 李风平,何潇,鲍晓明;壳聚糖酶产生菌的筛选及其酶解产物的初步研究[J];山东大学学报(理学版);2003年01期
15 段杉;彭志英;;无花果沙雷氏菌CH0203壳聚糖酶的纯化及生化性质研究[J];生物技术;2005年06期
16 单晓雪;郑人源;张涛;王玉明;;壳聚糖酶的研究进展[J];成都医学院学报;2007年Z1期
17 吴绵斌,黄萍;螺旋纤维床固定化反应器两步法生产壳聚糖酶[J];微生物学报;2003年06期
18 方祥年,黄秀梨,洪泂,杜昱光;壳聚糖、壳寡糖及壳聚糖酶的研究初探[J];吉林农业大学学报;1998年S1期
19 段杉,彭喜春,彭志英;壳聚糖酶产生菌的筛选及固定化细胞产酶[J];生物技术;2004年04期
20 张学昆,李加纳,陆合;曲霉Aspergillussojae壳聚糖酶的诱导及特性(英文)[J];农业生物技术学报;2004年04期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 刘昌燕;汪军;黄俊生;;壳聚糖酶在植物病害防治中的研究进展[A];植物保护科技创新与发展——中国植物保护学会2008年学术年会论文集[C];2008年
2 何潇;鲍晓明;;壳寡糖生产用酶产生菌株的筛选及其应用研究[A];中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集[C];2005年
3 陈小娥;方旭波;夏文水;;曲霉产壳聚糖酶的水解作用模式研究[A];2007年中国水产学会学术年会暨水产微生态调控技术论坛论文摘要汇编[C];2007年
4 孙玉英;张继泉;王淑军;刘万顺;;壳聚糖酶高产菌株的筛选、鉴定及基因的克隆和表达研究[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
5 马镝;;产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及抑菌活性研究[A];科学发展与社会责任(A卷)——第五届沈阳科学学术年会文集[C];2008年
6 孙玉英;张继泉;王淑军;;壳聚糖酶高产菌株的筛选、鉴定及基因的克隆和表达研究[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
7 黄燕;刘力;;壳聚糖保鲜研究及其在冷却肉保鲜中的应用[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李博;止血用壳聚糖的质量和安全控制研究[D];江南大学;2012年
2 朱丽英;以壳聚糖和纤维素硫酸钠为主要材料的结肠定位释药载体的研究[D];浙江大学;2011年
3 陈小娥;曲霉产壳聚糖酶酶学性质及作用机理研究[D];江南大学;2004年
4 张威;纳米壳聚糖的制备及降脂活性研究[D];江南大学;2013年
5 刘怀伟;腐皮镰孢菌壳聚糖酶CSN1的基因克隆、表达及其对致病性影响的研究[D];山东大学;2010年
6 段杉;无花果沙雷氏菌壳聚糖酶的生化性质及产酶条件的研究[D];华南理工大学;2003年
7 肖波;壳聚糖及其衍生物在抗菌与转基因领域的研究[D];华中科技大学;2011年
8 孙玉英;壳聚糖酶的性质及基因的克隆和表达研究[D];中国海洋大学;2007年
9 刘萍;绿色木霉产双功能酶的结构与功能研究[D];江南大学;2009年
10 周旋;壳聚糖微球制备优化及其乙酰化微球作为潜在栓塞材料的研究[D];中国海洋大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 余雄伟;壳聚糖抑菌机理研究[D];武汉工业学院;2011年
2 隋斯光;壳聚糖酶的分离纯化和性能研究[D];浙江大学;2005年
3 马翠翠;蝇蛆壳来源壳聚糖的制备及其性质研究[D];齐齐哈尔大学;2013年
4 张旭;碘化壳聚糖的制备及其性质的研究[D];大连工业大学;2013年
5 宋晓晨;海洋微生物壳聚糖酶菌株筛选及培养条件[D];大连工业大学;2010年
6 李剑峰;高产壳聚糖酶菌株的筛选及其酶解产物的研究[D];宁波大学;2010年
7 朱利平;草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)产壳聚糖酶发酵条件及酶性质研究[D];华侨大学;2011年
8 郑淑芬;壳聚糖酶产生菌筛选、诱导条件优化、动力学研究[D];浙江工业大学;2004年
9 余珍;壳聚糖敷料的应用与遗传毒性研究[D];杭州师范大学;2013年
10 张璐;发酵法生产壳寡糖菌种的选育及发酵工艺条件优化[D];山东轻工业学院;2012年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978