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滋补脾阴方药对大鼠脊髓损伤的修复作用及机理的实验研究

王鸿飞  
【摘要】:随着现代科技的发展和各种新型设备的应用,脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的发生已较普遍且逐年增加,全球不同的国家,SCI 的年发病率为15—40/100 万。由于SCI 常导致损伤平面以下感觉,运动及二便功能完全或部分丧失,有很高的致残率,给个人,家庭,社会带来巨大负担,因此,如何有效地保护损伤脊髓组织促进SCI 修复目前仍是各国科学工作者研究的热点和难点。SCI 的最终结果由原发性损伤和继发性损伤共同作用决定的,原发性损伤为不可逆性改变,故治疗主要是针对SCI 的血管改变、水肿,电解质改变,生化改变及能量代谢紊乱等一系列继发性损伤。近年来研究表明,凋亡(apoptosis)是继发性SCI 细胞死亡的重要方式,半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(cysteingl aspareate specific protease,caspase)家族的某些成员参与了凋亡信号传递,其中caspase-3 是细胞凋亡的最后执行者,如何对其干预则成为SCI 治疗的重要组成部分。细胞因子介导的炎性反应在脊髓继发性损伤中的作用越来越引起人们的重视, 其中白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)起着重要作用,当其异常增多时可能参与细胞凋亡。探讨SCI 后细胞凋亡特点及caspase-3,IL-1β表达规律,尤其是三者之间的关系对揭示SCI 机制具有重要意义。研究表明,氧自由基诱导的脂质过氧化是脊髓继发性损伤中重要的原因之一。线粒体(mitochodrial)是氧自由基产生的重要场所,且线粒体在细胞内环境稳定中起重要作用,因此,探讨脊髓细胞线粒体在SCI后的变化是寻求保护脊髓继发性损害的基础。祖国医学将脊髓损伤所致的外伤性截瘫,归属于中医的体惰和痿证的范畴,治疗上以活血化瘀、疏通督脉、通经活络、益气活血,补肾填精为主,肾主骨生精髓,精髓伤则肾伤,精血互生,且肾所生精髓需靠后天之本、气血化生之源的脾胃源源不断地充盈。滋补脾阴方药(nourishing piyin remedy)具有益气活血、补肾填精,充盈脾胃等功效,可以通过增强脑细胞线粒体抗氧化能力,调节磷脂代谢,抑制反应性胶质化及抑制炎性 反应等作用来保护脑神经元细胞,其对SCI 方面的作用研究未见报道。神经营养因子对脊髓神经元具有多方面的保护作用。新生健康乳牛脑提取液(bovine brain extract)包含有多种神经营养因子,已证明其对周围神经损伤修复有明显促进作用,其对SCI 方面的作用研究也未见报道。中药及牛脑来源广泛,价格低廉,副作用小,具有较大的实用价值,故本实验探讨了滋补脾阴方药对继发性SCI 中神经细胞的保护作用及其可能机制;探讨了牛脑提取液对SCI 修复的作用,为临床治疗SCI 提供理论依据和新方法,具有重要意义。 目的:研究大鼠脊髓损伤后白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)半胱氨酸天冬特异性蛋白酶(cysteingl aspartate specific protease ,caspase)表达和细胞凋亡的规律及三者之间的关系及滋补脾阴方药对它们的影响。 方法:成年SD 大鼠随机分为假手术组、损伤组和滋补脾阴方药组,于伤后不同时间点(1h、8h、24h、72h)处死,用免疫组化染色检测IL-1β、caspase-3 阳性细胞,TUNEL 法标记凋亡细胞。 结果:免疫组化结果显示假手术组仅有少量表达IL-1β和caspase-3阳性细胞;损伤组两者均在8h 表达最多,24h 减少,72h 减少至略多于假手术组。TUNET 标记阳性细胞的时间分布特点与IL-1β和caspase-3 相似,8h 最多72h 减少至较低水平。IL-1β、caspase-3 表达阳性细胞率和细胞凋亡指数三者间存在正相关;滋补脾阴方药使IL-1β、caspase-3 表达阳性细胞率和细胞凋亡指数降低。 结论:大鼠脊髓损伤后,IL-1β和caspase-3 表达增强,凋亡细胞大量出现,三者间存在正相关;滋补脾阴方药能够抑制脊髓损伤后的炎症反应,减少细胞凋亡,减轻脊髓继发性损伤。 目的:探讨滋补脾阴方药对兔脊髓损伤后线粒体系列酶活性的影响。方法:采用Allen 氏法致伤造成家兔脊髓损伤模型,随机分为假手术组,2h、12h、24h、60h 滋补脾阴方药组及各中药组生理盐水对照组,观察脊髓细胞线粒体Na+,K+-ATP 酶,Ca2+,Mg2+-ATP 酶活性及超氧化物岐化酶(SOD)和丙二醛(MDA)


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