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青藤碱和甲氨蝶呤预防类风湿关节炎的实验研究

刘艳  
【摘要】:背景与目的: 类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种不明原因的慢性、全身性自身免疫性疾病,其易感性与遗传和环境因素有关,主要特征为关节肿痛、关节破坏和血管翳形成。关节炎的病情可有浮动,通常呈进行性关节破坏、变形、失去劳动能力。放射线影像学改变可在早期出现,大约 30%患者在发病 1 年内出现骨侵蚀,而 3 年内骨侵蚀发生率将升至 70%。至今尚未发现可治愈 RA 的药物。但是,近年来研究显示,在 RA 确诊后 3 个月内,给予改变病情抗风湿药(disease modifyingantirhumatic drugs, DMARDs)治疗,可减缓病情进展。早期治疗效果直接影响RA 的预后。 甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)为叶酸拮抗剂,具有强大的免疫抑制和抗炎作用,目前该药治疗 RA 效果好,且减缓 RA 的影像学改变,因而成为一线 DMARD。 清风藤用于治疗风湿性疾病已 1000 余年,青藤碱是从中药清风藤中提取出来的有效成分。既往研究显示,青藤碱可改善试验性关节炎大鼠的病情,如:胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis ,CIA)、抗原诱导关节炎(antigeninduced arthritis ,AIA)和佐剂性关节炎 (adjuvant arthritis, AA)。但是,青藤碱对降植烷诱导的关节炎 (pristane induced arthritis, PIA)的作用目前尚不清楚,是否具有减缓 RA 病情进展的作用尚待研究。 降植烷诱导大鼠的关节炎是一种慢性、反复发作及进展性关节炎,与人类 RA非常相似,认为 PIA 是由 CD4+T 细胞介导的自身免疫性疾病。 本研究以 PIA 大鼠为研究对象,探讨青藤碱和 MTX 对 RA 的预防作用。 方法: 以 40 只雌性 Lewis 大鼠为研究对象,依据药物治疗情况将大鼠平均分为五组:正常组、模型组、MTX 治疗组、青藤碱治疗组及 MTX+青藤碱治疗组。除正常组外在大鼠的尾根部位皮内注射 0.2ml/只剂量的降植烷,以建立 PIA 模型,正常组大鼠皮内注射等量的生理盐水。正常组和模型组大鼠口服生理盐水(10mg/kg/d)共 ·2· 8w。其它三组大鼠口服青藤碱(120mg/kg/d) 和/或 MTX(3.8mg/kg/w)共 8w;肉眼 监测大鼠四肢发病情况并以 0~4 分记分。应用放射影像学及组织学评定骨及软骨 的破坏情况。Pristane 免疫后 0、1、3、5、8w 采集血清,-80℃冻存。免疫 8w 时在 乙醚麻醉下处死大鼠,取右踝关节在 10%中性福尔马林中固定,分离腹股沟淋巴结 和左踝关节滑膜-,80℃冻存。用放射免疫法检测血清 IL-6 和 IL-10 含量,用 ELISA 法检测血清中 TIMP 的含量。利用 Trizol 提取淋巴结和滑膜总 RNA,然后,用 RT-PCR 试剂盒扩增 cDNA,检测 IL-4、IL-10 和 IFN-γ的表达。PCR 产物进行半定量琼脂 糖凝胶电泳成像分析。 结果: 1.模型组大鼠关节炎在降植烷免疫 2w 后突然发病,3w 后减轻, 6-8w 病情 反复,以周围关节受累为主,发病率为 62.5%,关节 X 线摄片及病理显示关节滑膜 增生、软骨组织及骨组织呈典型的关节炎病变。 2.青藤碱治疗组 PIA 发病率为 75%,其关节炎指数与模型组没有显著性差异 ; MTX治疗组与青藤碱+ MTX治疗组PIA发病率均为12.5%,关节炎指数在造模后23~ 24d 明显低于模型组(p0.05)。青藤碱治疗组比模型组的关节病理和 X 线检查结 果略减轻;MTX 治疗组和青藤碱+ MTX 治疗组的关节病理和 X 线检查没有关节炎表 现。 3.PIA 模型大鼠血清 IL-6 水平在降植烷免疫后的 1、3、8w 增高,与免疫前 比较有显著性差异(p0.05),出现 2 次高峰分别在 1 和 8w;5 周时 IL-6 下降, 与 1w 比较有显著性差异(P0.05)。PIA 模型大鼠血清 IL-10 水平比正常组高,但 无显著性差异;在腹股沟淋巴结和踝关节滑膜表达增高的细胞因子有 IFN-γ、IL-4 和 IL-10。模型组大鼠血清 TIMP 水平在降植烷免疫后 1w 与 3、8w 比较明显升高 (p0.05),但在同一时点与其它组比较无显著性差异。 4.MTX 治疗组和 MTX+青藤碱治疗组血清 IL-6 水平在降植烷免疫后 1、3、8w 与模型组比较均有显著性差异(p0.05);腹股沟淋巴结 IL-4 、IL-10 和 IFN-γ mRNA 表达及血清 IL-10 水平与模型组比较明显降低(p0.05)。 5.青藤碱治疗组血清 IL-6 水平在降植烷免疫后 1、3、8w 与模型组比较均有 显著下降(p0.01),且在 1w 时与 MTX 治疗组比较下降明显(p0.01);血清 IL-10 和 TIMP、踝关节滑膜 IL-4 mRNA 表达及腹股沟淋巴结 IL-4 和 IFN-γ mRNA 表达 与模型组比较均无显著性差异。 结论: 1.PIA 大鼠模型与人类 RA 发病及病理特点极为相似,是研究 RA 较理想的模 型。 2.PIA 大鼠的发病机制可能与 IL-6 和 IFN-γ表达上调、IL-4 和 IL-10 产生


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1 刘艳;青藤碱和甲氨蝶呤预防类风湿关节炎的实验研究[D];大连医科大学;2005年
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