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锂-匹罗卡品癫痫大鼠小脑中胶质细胞反应性观察及银杏叶提取物干预研究

张允  
【摘要】:背景:癫痫因其较高的发病率和严重的危害性,成为发作性中枢神经系统疾患中备受关注的疾病之一。以往对癫痫的研究大多着眼于大脑皮层、海马及内嗅皮层等敏感脑区。近年来,不少基础和临床研究提示:小脑对癫痫的产生、传播和终止具有重要的控制和调节作用;同时,长期反复的癫痫发作可以造成小脑一定程度的损伤。可见,癫痫和小脑之间存在一定相互关系,明确小脑在癫痫发病中的地位将会为癫痫的发病和治疗提供新的思路。另有研究表明,银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract, GBE)具有一定抗惊厥和辅助治疗癫痫作用,但是其中隐藏的机制尚需进一步研究探讨。 目的:本试验通过观察锂-匹罗卡品癫痫大鼠行为学、脑电图变化和小脑中GFAP 免疫染色特点,初步探讨小脑与癫痫的关系,评估银杏叶提取物对癫痫的干预作用。 方法:实验选用成年雄性SD 大鼠制备锂-匹罗卡品癫痫(Lithium-Pilocarpine Seizure, LPS)模型,观察模型鼠行为、脑电图及小脑神经元和星形胶质细胞的变化;同时采用对照研究方法评估GBE预处理给药和急性给药对癫痫和小脑的干预效应。 结果: 1. 模型组大鼠40 只,死亡率10%;在存活的36 只大鼠中,33 只在造模急性期出现4 级以上癫痫发作,占91.67%;慢性期,模型组全部大鼠均出现癫痫的自发性再发作(spontaneous recurrent seizures, SRSs),发作频率为2-4 次/周;模型组大鼠脑电图记录可见明显异常,表现为频率增块、波幅增高,并有棘波或棘波群发放。综上可认为模型制备成功。 2. 在模型鼠小脑内,c-Fos 免疫组化染色和Nissl 染色均未看到明显的神经元激活和神经元脱失。 3. GFAP(glial fibrillary acidic protein)免疫组化染色可见模型组大鼠小脑前叶颗粒细胞层有大量GFAP-IR(GFAP immunoreactivity)阳性细胞,与对照组差异显著(P0.01);小脑后叶、绒球小结叶GFAP-IR阳性细胞明显少于小脑前叶;此外,造模后随时间的延长模型组大鼠小脑前叶颗粒细胞层GFAP-IR 阳性细胞数有先增多后减少的趋势,造模后1 天GFAP-IR 阳性细胞数达到高峰,其后3 天、7 天、14 天逐渐少,但与对照组相比仍有显著差异;造模后60 天GFAP-IR 阳性细胞数减少至正常水平,与对照组无明显差异。 4. GBE 预处理给药组大鼠癫痫发作级别较模型组明显降低(P0.01),脑电图的异常得到有效改善;与模型组相比,该组大鼠小脑前叶GFAP-IR 阳性细胞数减少(P0.01)、胞浆光密度值升高(P0.01)。GBE 急性给药上述作用不明显。 结论: 1. 癫痫发作可以已通过一定途径激活小脑内星形胶质细胞,但对神经元的影响不明显。小脑中星形胶质细胞的增生激活可能预示小脑局部损伤的出现。 2. 癫痫主要影响小脑前叶,即脊髓小脑区域,这可能与该部位特殊的生理功能和解剖联系有关。 3. 银杏叶提取物预处理给药可以有效抑制癫痫鼠小脑前叶形星胶质细胞的激活,对癫痫导致的小脑损伤可能有一定防治作用。


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