结核分枝杆菌RmlA的表达、纯化以及酶促反应动力学研究

【摘要】： 目的:结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)是引起结核病的病原体。世界卫生组织统计表明,世界上每年发生结核病900万,每年大约有300万人死于结核病。结核病已经成为造成死亡人数最多的传染病之一。人类面临着耐多药结核分枝杆菌菌株的挑战,研制新一代抗结核药物迫在眉睫。由于细胞壁是分枝杆菌赖以生存的结构基础,所以结核分枝杆菌的细胞壁可以作为新药开发的靶标。其核心结构由肽聚糖、聚阿拉伯糖半乳糖和分枝菌酸组成。分枝菌酸和聚阿拉伯糖半乳糖通过衔接双糖(L-鼠李糖-D-N-乙酰葡糖胺)共价连接到肽聚糖大分子上。如果破坏了衔接双糖的结构,就会破坏结核分枝杆菌的细胞壁,导致细菌死亡。由于人体中不存在鼠李糖分子,因此鼠李糖可作为研发新一代抗结核药物的重要靶点。分枝杆菌中的四种酶RmlA,RmlB,RmlC和RmlD参与了由底物葡萄糖-1-磷酸合成dTDP-鼠李糖的过程。深入研究这四种酶的酶促反应动力学特性将有助于建立酶反应方法以筛选酶抑制剂,从而发现新的抗结核药物。本研究的目的:(1)用pET29b表达载体在大肠杆菌中高表达结核分枝杆菌的RmlA蛋白质;(2)采用亲和层析技术纯化RmlA蛋白质;(3)用SDS-PAGE和Western blot鉴定所纯化的RmlA蛋白质;(4)建立测定RmlA酶活性的方法;(5)确定RmlA酶的最佳反应条件并测定RmlA酶的反应动力学常数。本研究所获得的结果: 1.诱导RmlA蛋白质在大肠杆菌BL21(DE3)中表达用不同条件(IPTG浓度、诱导温度及诱导时间等)诱导rmlA基因的表达。用超声方法破碎诱导的BL21(DE3),对上清和沉淀组分进行SDS-PAGE分析。结果表明RmlA酶蛋白在BL21(DE3)中得以表

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3	李燕,杨正林,李明远;结核分枝杆菌耐药性的分子机理研究进展[J];微生物学免疫学进展;2000年02期
4	黄健;;结核分枝杆菌诱导单核/巨噬细胞凋亡:早期膜变化与胞内结核分枝杆菌活力[J];国外医学(微生物学分册);2001年05期
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14	龚莉莉;杨小生;戎聚全;杨再昌;余跃生;党荣敏;谢洪书;刘晓炎;姚文琴;;结核分枝杆菌在自制培养基上快速生长初步观察[J];微生物学杂志;2006年04期
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16	高桂华;刘玉娥;柏海兰;陶墨奎;高亚春;杨华;;双向培养基快速分离培养结核分枝杆菌研究[J];江苏预防医学;2008年01期
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中国博士学位论文全文数据库

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2	陈嘉臻;结核分枝杆菌特异的RD2/RD11蛋白应用于结核免疫诊断的研究[D];复旦大学;2009年
3	王平;肺分枝杆菌感染临床特征、耐药模式、预后研究及肺组织结核分枝杆菌巢式PCR检测[D];北京协和医学院;2011年
4	陈军;武汉地区结核分枝杆菌药物敏感性及氟喹诺酮耐药分子机制研究[D];华中科技大学;2011年
5	陈军;武汉地区结核分枝杆菌药物敏感性及氟喹诺酮耐药分子机制的研究[D];华中科技大学;2011年
6	乐军;耐药结核分枝杆菌的多维分析[D];复旦大学;2003年
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10	范雄林;结核分枝杆菌基因疫苗的构建及其免疫学特性的初步研究[D];第四军医大学;2001年

中国硕士学位论文全文数据库

前10条

1	蔡溢;结核分枝杆菌RmlA的表达、纯化以及酶促反应动力学研究[D];大连医科大学;2006年
2	王霞芳;IFN-γ增强BALB/c小鼠对结核分枝杆菌感染的抵抗力[D];苏州大学;2002年
3	曹立雪;应用膜芯片检测结核分枝杆菌rpoB基因突变[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
4	韩喜琴;噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌药物敏感性研究及评价[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2004年
5	王琳;结核分枝杆菌ClpX和ClpP2蛋白酶的克隆表达及其性质研究[D];西南大学;2010年
6	丁卫民;耐多药肺结核与结核分枝杆菌L型感染的临床研究[D];山西医科大学;2003年
7	吴玉敏;1.结核分枝杆菌去标签Mtb8.4-Hspx和Hspx-Mtb8.4基因克隆及表达 2.FTY720对肾移植受者治疗的安全性和有效性系统评价[D];兰州大学;2010年
8	佘茜;结核分枝杆菌PPE68蛋白的表达及初步应用[D];重庆医科大学;2011年
9	申峻松;结核分枝杆菌lhp基因的原核表达及其产物的单克隆抗体研制[D];扬州大学;2008年
10	宋宇;结核分枝杆菌MurA的优化表达及功能分析[D];大连医科大学;2010年

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1	记者韩晓玲　通讯员范敬群金安江;华中农大研究成果获世界声誉[N];湖北日报;2009年
2	庄愉;新型抗结核疫苗的开发研究[N];中国医药报;2002年
3	记者陈青;让结核菌三天内原形毕露[N];文汇报;2009年
4	钱忠军;华中农大发现新基因有望控制结核病[N];江苏科技报;2009年
5	驻鄂记者钱忠军　通讯员金安江范敬群;发现可能控制结核病的新基因[N];文汇报;2009年
6	记者黄每裕;珠海推出两种检测试剂新产品[N];中国医药报;2009年
7	记者项铮;团山会议研讨罕见病原体防治策略[N];科技日报;2009年
8	庄愉;新型抗结核疫苗的开发研究[N];中国医药报;2002年
9	;整合力量抗击“瘟神”[N];中国医药报;2003年
10	宋心德;ＩＤＳＡ２基因导致结核杆菌产生抗药性[N];医药经济报;2004年

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