角膜缘干细胞的体外培养及以羊膜为载体培养的角膜缘干细胞移植的实验研究

【摘要】： 目的:探讨兔角膜缘干细胞体外培养的方法,观察以羊膜为载体培养的角膜缘干细胞移植治疗兔眼角膜缘干细胞缺陷的疗效。 方法:采用组织块培养法对兔角膜缘干细胞行体外原代培养,传代后接种于去上皮人羊膜上,采用气—液界面法(air-lifting)继续培养。观察培养细胞的生长情况,并对培养的细胞行组织学和免疫荧光染色进行鉴定。选取健康新西兰大白兔30只,通过严重碱烧伤左眼角膜制成角膜缘干细胞缺陷的兔眼模型,用以羊膜为载体培养的角膜缘干细胞对伤眼进行移植。实验共分3组,即以羊膜为载体培养的角膜缘干细胞移植组(AM+LSC)、单纯去上皮羊膜移植组(AM)、对照组,每组10兔10眼。术后每周对眼表情况进行临床观察,术后1个月取角膜进行组织病理学和免疫组织化学研究。 结果:体外培养的兔角膜缘干细胞生长良好,传代后可在去上皮羊膜上继续分化、增殖为3-4层的复层角膜上皮细胞层,且细胞与羊膜组织粘附牢固。经组织学和免疫荧光染色鉴定证实为角膜缘干细胞。以羊膜为载体培养的角膜缘干细胞移植术后兔眼角膜迅速上皮化,角膜中央无新生血管生长,角膜恢复光滑透明。组织病理学染色及细胞角蛋白AE1单克隆抗体免疫组化证实:角膜呈现正常角膜上皮层的结构特点,未见杯状细胞和新生血管,上皮层细胞AE1染色阳性。单纯去上皮羊膜移