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RHAMM和CD44在髓母细胞瘤中的表达及其与白藜芦醇抗髓母细胞瘤作用的关系

杨志岗  
【摘要】: 目的:1)观察透明质酸受体RHAMM和CD44在人髓母细胞瘤细胞系UW228-2和-3和肿瘤组织中的表达情况;2)探讨白藜芦醇在抗髓母细胞瘤作用中对RHAMM和CD44基因表达的影响;3)研究RHAMM和CD44在白藜芦醇诱导髓母细胞瘤细胞分化、凋亡及细胞周期阻滞中所发挥的作用;4)分析RHAMM和CD44与髓母细胞瘤高度侵袭性的相关性。 方法:人髓母细胞瘤细胞系UW228-2和-3培养于含有10%胎牛血清的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium)培养基中,100μM白藜芦醇(resveratrol, Res)处理细胞48小时后用于细胞形态观察和免疫细胞化学染色;制备细胞悬液并离心沉淀用于RNA和蛋白质的提取;采用RT-PCR、免疫细胞化学、免疫荧光和Western-Blot等方法分析白藜芦醇处理前后UW228-2和-3中RHAMM和CD44在核酸和蛋白质水平以及在细胞内的分布情况。对来自临床的11例髓母细胞瘤和其对应的瘤旁相对正常小脑组织的石蜡包埋标本,利用自行研制的组织微阵列仪制成石蜡组织微阵列,而后进行RHAMM的免疫组织化学染色,观察其在髓母细胞瘤及其对应的瘤旁相对正常脑组织中的表达情况。 结果:1)RHAMM在髓母细胞瘤组织及瘤旁相对正常脑组织中均有分布,未观察到明显差别;2)白藜芦醇处理前后的髓母细胞瘤UW228-2和-3细胞系中,RHAMM的表达在mRNA和蛋白水平上均未见明显改变;3)在胞浆及胞核中均可见到RHAMM的分布,且胞浆中以与微管蛋白相结合形式存在;4)CD44s在上述两个细胞系中均有表达,但未检测到CD44v的存在;5)CD44s在白藜芦醇处理前后的的两个细胞系中未见明显变化。 结论:1) RHAMM在髓母细胞瘤组织及瘤旁相对正常脑组织中表达一致,提示RHAMM在髓母细胞瘤高度侵袭性的生物学行为中可能不起关键作用;2)白藜芦醇诱导的髓母细胞瘤细胞分化、凋亡及周期阻滞与RHAMM可能无直接关系;3) RHAMM在正常神经细胞及肿瘤细胞的胞浆、胞核中均有分布,在胞浆中与微管蛋白相互作用;4)CD44s可能是促进髓母细胞瘤细胞侵袭的一个重要因素;5)尽管白藜芦醇可以通过诱导细胞凋亡和分化而发挥抗髓母细胞瘤的效应,但对于抑制瘤细胞的侵袭可能无明显作用。


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