收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人骨髓间充质干细胞向软骨诱导分化的基础研究

白彦东  
【摘要】: 软骨缺损的修复一直是矫形外科的难题。早期开展的微骨折技术、骨膜软骨膜移植、软骨细胞移植等方法都存在诸多问题。上世纪80年代开始,组织工程的发展和应用为软骨缺损和修复带来了新的希望。支架材料、生长因子、种子细胞是组织工程的三要素,随着制造技术的进步,支架材料的研究已取得突飞猛进的进展,已有人工骨应用于临床。而目前种子细胞是制约组织工程发展的瓶颈之一。骨髓间充质干细胞因其成体干细胞特征和易获取性,近年来倍受关注。但是,骨髓间充质干细胞的分离、纯化、鉴定以及多向分化条件和机理等目前都不十分清楚。不论是基础研究还是临床应用,人们都希望获得稳定的、纯化的、大量具有骨髓基质干细胞生物学表型和功能的种子细胞,以便为基础研究提供标准的细胞,为临床应用提供细胞库,真正实现体外构建组织器官的目的。为了达到以上目的,最佳途径就是建立骨髓间充质干细胞的细胞系。 目的:探索骨髓间充质干细胞培养条件。观察间充质干细胞生物学行为和向软骨诱导分化的能力。以供组织工程基础研究及骨科临床应用。 方法:抽取5例健康志愿者骨髓,每例约4ml,利用含Hyclone胎牛血清的DMEM低糖培养液培养,进行细胞培养并探索条件。取正常骨髓做骨髓间充质干细胞的原代培养和传代培养,对该细胞进行流式细胞分析鉴定,根据临床研究与应用需求诱导分化,配制条件培养液。采用软骨诱导条件培养基:完全培养基加地塞米松、TGF-β_1、维生素C,终浓度为, 5ug/L, 10mmol/L; BMSCs细胞进行软骨细胞诱导6, 12, 18, 24d,相差显微镜观察,HE染色观察细胞形态;免疫细胞化学染色观察软骨细胞诱导II型胶原的表达,原位杂交观察软骨细胞诱导II型胶原mRNA表达 结果:10%的血清最有利于细胞生长,Percoll细胞分离液分离细胞可以得到更纯化的细胞,细胞首次换液时间为6天。对传代培养细胞进行流式细胞分析鉴定,细胞表达CD29, CD71, CD106,不表达CD34, CD45,表明培养细胞是间充质干细胞。hBMSC细胞可以条件诱导为软骨,具有成体干细胞的特征。结合细胞表面分子检测结果,可以认为BMSCs细胞为骨髓内的间充质质干细胞。 结论:人骨髓间充质干细胞优化培养条件:10%胎牛血清、DMEM低糖培养基,首次换液时间为6天,密度梯度离心法分离细胞有利于获得较纯化的细胞,全骨髓贴壁分离法更有利于细胞生长;可培养出纯化的人骨髓间充质干细胞,细胞不表达造血系细胞表面特异分子,并具备多向分化的成体干细胞特征;人骨髓间充质干细胞可以作为软骨组织工程的种子细胞。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 陈铁;张灵敏;储彬;汤顺清;;三维支架中骨髓间充质干细胞及软骨细胞和脂肪源性成熟基质细胞的成软骨效应[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年16期
2 詹兴旺;姜艳;王文良;;细胞共培养在组织工程研究中的应用及价值[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年20期
3 杨淑野;查振刚;;转基因骨髓间充质干细胞在软骨组织工程中的研究与应用[J];临床骨科杂志;2007年04期
4 陈国仙;王万明;;骨髓间充质干细胞及其在椎间盘组织工程中应用的研究进展[J];中国脊柱脊髓杂志;2007年06期
5 李玲玲;李晶;;间充质干细胞研究进展及其临床应用前景[J];中国实用医药;2009年32期
6 张翼;宋敬锋;白俊清;;骨髓间充质干细胞研究进展及在软骨组织工程中的应用[J];中国煤炭工业医学杂志;2007年01期
7 李娜,张西正,郭勇;组织工程中应力对骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞的影响[J];细胞生物学杂志;2004年06期
8 陈金飞;张允申;马勇;;骨髓间充质干细胞在治疗关节软骨损伤组织工程方法中的研究进展[J];中国中医骨伤科杂志;2010年02期
9 张玉富;霍春月;;骨髓间充质干细胞出现软骨细胞表型后与壳聚糖/胶原三维多孔支架的复合培养[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年23期
10 钱寒光;赵基栋;祝建中;;人骨髓间充质干细胞分离培养及多向分化的实验研究[J];交通医学;2006年02期
11 韩京;冉新泽;艾国平;粟永萍;;骨髓间充质干细胞及其临床应用研究进展[J];现代生物医学进展;2007年12期
12 池光范,侯宜,侯立中,颜炜群,杨同书;应用同种异体组织工程软骨修复关节软骨缺损观察[J];中国地方病学杂志;2004年04期
13 张勇;赵建宁;;组织工程软骨细胞体外培养技术要点[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年42期
14 马翰斐;刘国雄;;改良鼠耳廓软骨细胞体外培养的实验研究[J];哈尔滨医药;2010年04期
15 徐鹏;舒畅;赵子义;张伟;;免疫磁珠法分离纯化骨髓间充质干细胞及向神经细胞定向分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年20期
16 戴文达;方涛林;李熙雷;林红;董健;陈峥嵘;;人骨髓间充质干细胞的分离培养、多向分化与鉴定[J];复旦学报(医学版);2008年03期
17 王光辉,牟虹,梁传余;骨髓间充质干细胞及其在软骨组织缺损修复中的研究进展[J];中国矫形外科杂志;2004年11期
18 雷鸣;刘世清;刘宇兰;彭昊;汪喆;;藻酸钠微球中骨髓间充质干细胞向软骨细胞的定向分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年19期
19 韩建伟;杨彤涛;孙宏慧;高杰;刘国柱;裘秀春;范清宇;马保安;;成人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为软骨细胞的实验研究[J];中国骨与关节损伤杂志;2008年11期
20 纪玲;武延格;孙学峰;王正;杨林;;DiI荧光标记的软骨细胞与支架材料复合后的观察[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);2009年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 颉玉欣;张进贵;郭晓华;赵萌;李亚;刘燕;;鼠剑突软骨细胞的体外分离与培养[A];河北省免疫学会第5次会员代表暨学术大会论文摘要集[C];2006年
2 李忠;杨柳;段小军;陈光兴;林炎水;;胶原凝胶包埋软骨细胞接种CPPf/PLLA支架体外构建组织工程软骨[A];第二届海峡两岸矫形外科学术研讨会论文集[C];2004年
3 潘浩;;软骨缺损的组织工程修复种子细胞研究进展[A];2007年浙江省医学会骨科学学术会议暨浙江省抗癌协会骨软肿瘤学术会议论文汇编[C];2007年
4 程友;黄金中;李泽卿;江满杰;吴昆旻;季俊峰;王秋萍;;以PLGA包埋甲壳胺无纺布为支架构建内衬上皮的管状组织工程软骨[A];中华医学会第十次全国耳鼻咽喉-头颈外科学术会议论文汇编(上)[C];2007年
5 罗旭松;周广东;刘伟;张文杰;岑莲;曹谊林;;体内外联合培养提高组织工程管状软骨构建质量[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
6 罗旭松;周广东;刘伟;张文杰;岑莲;曹谊林;;体内外联合培养提高组织工程管状软骨构建质量[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
7 柏涛;舒军;;兔自体细胞-载体复合物修复关节软骨缺损的实验研究[A];玉溪市第三届骨科学术研讨会论文汇编[C];2007年
8 苏伟;赵劲民;魏凌云;;兔骨髓间充质干细胞体外扩增培养影响因素的实验研究[A];第六届西部骨科论坛暨贵州省骨科年会论文汇编[C];2010年
9 张亚;王晓东;尹航;张锡庆;董寅生;;兔骺板软骨细胞与多孔聚乳酸、多孔丝素材料的体外相容性[A];中华医学会第八次全国小儿外科学术会论文集[C];2010年
10 郑有华;张志光;蒋柳宏;叶明福;苏凯;;人骨髓间充质干细胞在珊瑚骨表面的生长状况[A];第七次全国颞下颌关节病学及(牙合)学研讨会暨《颞下颌关节紊乱病及口颌面疼痛的基础与临床进展》国家级继续教育学习班论文汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王光辉;大鼠骨髓间充质干细胞三维定向诱导和体内构建组织工程软骨的初步实验研究[D];四川大学;2005年
2 黄定强;骨髓间充质干细胞定向诱导分化的实验研究[D];四川大学;2004年
3 符彦基;骨形成蛋白-7基因修饰的骨髓间充质干细胞对肾缺血再灌注损伤修复作用的实验研究[D];南昌大学;2008年
4 唐尤超;hBMP-2基因修饰促进骨质疏松症骨愈合的实验研究[D];四川大学;2005年
5 李连欣;bFGF基因转染MSCs复合纳米仿生骨治疗骨缺损的实验研究[D];山东大学;2004年
6 王艳梅;人VEGF_(165)转基因组织工程软骨的实验研究[D];中国协和医科大学;2009年
7 杜佳梅;以小耳残耳软骨细胞为种子细胞的组织工程软骨的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
8 陈书军;组织工程软骨的构建及修复关节软骨缺损的实验研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
9 祁军;大鼠骺板软骨细胞体外三维培养及细胞响应力学信号的初步机制[D];华中科技大学;2011年
10 孙安科;同种异体组织工程化软骨的构建及其应用[D];第四军医大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 白彦东;人骨髓间充质干细胞向软骨诱导分化的基础研究[D];大连医科大学;2008年
2 邢双春;ChM-I和CTGF蛋白在MSCs和软骨细胞中的差异表达[D];大连医科大学;2008年
3 吴政安;消痹灵体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的观察[D];湖北中医学院;2007年
4 李修洋;LMP-1诱导骨髓间充质干细胞修复骨缺损的实验研究[D];重庆医科大学;2008年
5 林增平;不同力学刺激对人BMSCs向软骨细胞分化的实验研究[D];福建医科大学;2009年
6 王广欣;变性I型胶原对晚代骨髓间充质细胞成骨能力的影响[D];中国医科大学;2008年
7 张海龙;兔骨髓间充质干细胞在壳聚糖支架上培养的体外研究[D];第二军医大学;2007年
8 项盈;复苏的骨髓间充质干细胞的体外培养和多向分化潜能的研究[D];浙江大学;2005年
9 常庆;AdLacZ基因修饰的山羊耳软骨细胞复合F127构建组织工程化软骨的实验研究[D];苏州大学;2007年
10 李娜;组织工程中应变对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 丁香;成人干细胞的突破——首次组织工程气管移植成功[N];中国医药报;2008年
2 本报记者 唐闻佳;“一只假耳朵,骗取三个亿”?[N];文汇报;2011年
3 本报记者 汪敏华;组织工程:再造器官可能圆梦[N];解放日报;2001年
4 本报记者 吴洁;为实现“人体配件工厂”的梦想[N];科技日报;2002年
5 早报记者 李祎;交大认定“人耳鼠”技术真实[N];东方早报;2011年
6 沈英甲;组织工程:新的医学奇迹[N];中国中医药报;2001年
7 记者  邱曙东;上海正开展兔子膀胱修复实验[N];解放日报;2006年
8 记者 张建松;上海梦想“掏心换肝”[N];新华每日电讯;2001年
9 本报记者 王春 特约通讯员 李佳;探访组织工程“梦工厂”[N];科技日报;2005年
10 记者 张建国;首届生物材料与组织工程产品质量控制国际研讨会举行[N];中国医药报;2009年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978