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冬虫夏草(代号832)发酵菌丝体的研究

孙倩  
【摘要】:目的: 冬虫夏草(Cordyceps Sinensisi(Berk.)Sacc)为我国一种名贵的中药材,具有补肺益肾,止血化痰的功效,可用于治疗久咳虚喘,劳嗽咯血,阳痿遗精,腰膝酸痛等,但其资源短缺,价格昂贵。现市面上大多采用深层发酵法生产冬虫夏草发酵菌丝体以替代天然虫草。我们选取野生冬虫夏草子座进行组织分离,获得无性阶段纯种,为冬虫夏草(代号832)菌株。优化其发酵培养基组成及发酵工艺,初步研究其药理作用,并采用指纹图谱方法控制其内在质量,具有十分重要的意义,可为冬虫夏草(代号832)发酵菌丝体的进一步开发和研究提供必要的基础工作。 材料与方法: 我们选取野生冬虫夏草子座进行组织分离,获得无性阶段纯种,为冬虫夏草(代号832)菌株。本研究以菌丝体干重、胞外多糖、菌丝体中腺苷为试验指标,通过单因素试验及正交试验优化冬虫夏草(代号832)菌株的深层发酵培养基组成及发酵条件,对冬虫夏草发酵菌丝体进行了小鼠抗疲劳试验、耐缺氧试验及大鼠抗炎试验,初步研究其药理作用,最后采用HPLC指纹图谱方法,为冬虫夏草发酵菌丝体的质量评价提供可借鉴的依据。 结论: 1以冬虫夏草(Cordyceps Sinensisi(Berk.)Sacc)代号832菌株为材料,通过单因素试验及正交试验得出以葡萄糖为碳源,牛肉浸膏为氮源,磷酸二氢钾、硫酸镁为无机盐时较适合冬虫夏草(代号832)菌株的深层发酵,并得到最佳培养基配方为葡萄糖6.5 g/L,牛肉浸膏6.5 g/L,磷酸二氢钾1.7 g/L,硫酸镁1.5 g/L。通过对发酵工艺的优化,得出当接种量为15 %,在250 mL的三角瓶中装液75 mL,初始pH 7.0,并且在18℃温度环境下培养时,最适合冬虫夏草(代号832)菌株的发酵。经优化得到的发酵培养基及发酵条件,可以使发酵产物产量大幅提高,高于国家药典标准。 2通过多项药理试验,并且同课题组前期试验结果比对,证明冬虫夏草(代号832)发酵菌丝体可以非常显著地提高小鼠的体力,延长其游泳时间,并且可以降低小鼠运动后血清内的尿素氮、全血乳酸含量,提高血清内肝糖原及肌糖原的含量,具有明显的抗疲劳作用;冬虫夏草发酵菌丝体还可以明显延长小鼠的常压耐缺氧时间;可以显著改善大鼠关节炎症状,通过降低血清内TNF-α的含量,从而抑制细胞因子的促炎效应。 3通过对冬虫夏草(代号832)发酵菌丝体的HPLC指纹图谱研究,建立了以Agilent Eclipse XDB-C_(18)柱(4.6 mm×150 mm,5μm)为色谱柱;流动相采用甲醇5 %~60 %梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长260 nm;进样量10μL,所有组分在40 min内检测完毕的分析方法。经方法学验证该方法精密度、重复性、准确性均较好,可以很好地控制冬虫夏草发酵菌丝体的质量。


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