收藏本站
收藏 | 论文排版

活血行气方药物血清对人胃癌SGC-7901细胞株作用的实验研究

曲婷婷  
【摘要】:目的:胃癌在世界范围内和我国均是最常见的恶性肿瘤之一。根据世界卫生组织公布的全球统计报告,世界胃癌年发病率为13.86/10万人,仅次于肺癌居第二位。我国是胃癌的高发区,每年我国新发现40万胃癌患者,占世界胃癌发病人数的42%。中国胃癌死亡率是欧美发达国家的4-8倍。胃癌是当前危害我国人民身体健康的重大疾病。对于肿瘤的治疗方法大多采用手术配合放射疗法和化学疗法的治疗手段,但多数抗肿瘤药物缺乏选择作用,肿瘤患者在接受放射、化学疗法杀伤肿瘤细胞的同时,对机体正常组织和细胞也有相当大的损伤。常会出现如骨髓造血功能抑制、消化道反应、免疫功能低下、肝脏及肾脏等组织的损害等。目前已经有大量实验研究表明,许多中药及中药复方具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、改善机体免疫力、诱导肿瘤细胞分化、抑制肿瘤细胞基因表达、抑制肿瘤细胞转移、逆转多药耐药、抗突变抗氧化等作用。中医对于胃癌的发病,认为多是由于先天不足、正气亏虚,导致外邪侵袭;或是由于饮食不节、导致脾胃损伤;或是由于情志失调、气机不畅;或是由于劳逸失当、导致气滞血瘀等因素,最终可造成或加重脾胃损伤,脾失健运,胃失和降,湿聚生痰,痰阻血脉,导致血行不畅,进而化生瘀毒,阻于胃脘。日久逐渐形成积聚,进一步导致机体脏腑功能失调,气机运行失畅,体内津液代谢紊乱,最后瘀血、邪毒、痰浊相互搏结而发病。在治疗上多采用健脾以运化水谷、化生气血,活血化瘀,化痰散结,清热解毒、调肝补肾、益气养阴、扶正祛邪等,提高机体的抗病能力,改善症状,控制肿瘤生长、转移和侵袭。纵观活血行气方,具有活血祛瘀、行气止痛的功效,能解气分之郁结,活血而不耗血,祛瘀又能生新,起到气血兼顾,符合“气行则血行”之治疗原则。对于改善胃癌中晚期肿胀、腹满、疼痛等症状有一定的作用。通过此实验,探讨中药药物血清抗胃癌作用机制,为国药治疗胃癌提供有力依据。 材料与方法:实验以人胃癌SGC-7901细胞株为实验对象,对人胃癌SGC-7901细胞株进行体外细胞培养,通过中药血清药理学方法研究活血行气方药物血清对人胃癌SGC-7901细胞株作用机制。体外细胞培养是指从动物活体体内取出组织,于模拟体内生理环境等特定的体外条件,进行孵育培养,使之生存并生长。血清药理学方法是指将中药或中药复方经口给动物灌服一定时间后采集动物血液,分离血清,用含有药物成分的血清进行体外实验的实验方法。实验选择SD大鼠30只,雌雄各半,体重180g-220g,中药煎剂1ml/100g大鼠,中药汤剂灌胃给药,2ml/次,每日两次给药,连续3天;对照组、西药组予生理盐水等量等次灌胃3天。分别在末次给药后2小时采血,戊巴比妥钠麻醉,无菌条件下进行腹主动脉取血,把同种条件药物血清混匀、过滤,56℃,30min灭活,-20℃保存备用。 实验随机分为正常血清对照组(对照组) ,西药组,中药组,中西医结合组。其中,对照组为大鼠血清加入RPMI1640培养液,浓度10%;西药组用含10%顺铂组大鼠血清RPMI1640培养液配制,DDP的终浓度为5ul/ml(小),10ul/ml(中),20ul/ml(大)三组;中药组为大鼠药物血清加入RPMI1640培养液,浓度分别为5%(小)、10%(中)、20%(大)三组;中西医结合组为含中药浓度10%+ DDP终浓度20ul/ml组成。 实验首先采用MTT比色法测定人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制率,MTT比色法作为一种检测细胞存活和生长的方法,其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。经药物处理后的细胞株经HE染色后,制成光学显微镜标本;药物处理后人胃癌SGC-7901细胞株经固定、脱水、包埋等程序后制成透射电镜标本,通过光镜、透射电镜观察经活血行气方药物血清处理后的人胃癌SGC-7901细胞株的形态学变化;通过DNA琼脂凝胶电泳法检测人胃癌SGC-7901细胞凋亡梯带分析及流式细胞化学方法研究人胃癌SGC-7901细胞在活血行气方药物血清影响下细胞形态学变化、细胞凋亡定性定量分析,测定细胞凋亡率。 本实验通过蛋白质印迹(Western blot)法测定经活血行气方药物血清处理后的SGC-7901人胃癌细胞株P53、Bcl-2基因蛋白表达水平的变化,对经过药物处理后的细胞进行细胞蛋白质的提取,蛋白质的SDS-PAGE电泳,蛋白质转膜、抗体杂交、化学发光显影定影后,图像分析。 本实验中,对药物处理后细胞进行固定、脱水、复染等程序后进行酶细胞化学染色,通过酶细胞化学染色方法观察活血行气方药物血清对人胃癌SGC-7901细胞株Mg~2+-ATP酶、G-6-P酶活性的影响。 结果: 1.经活血行气方药物血清作用人胃癌SGC-7901细胞株24h后,实验结果显示,中药小剂量组未见明显抑制作用,其余各组均表现出不同程度的抑制作用,中药中剂量组的抑制率为17.24%,中药大剂量组的抑制率为24.76%,中西医结合组的抑制率为42.97%;经活血行气方药物血清作用人胃癌SGC-7901细胞株48h后,中药小剂量组出现抑制作用,其抑制率为21.79%,中药中剂量组的抑制率为34.95%,中药大剂量组的抑制率为48.26%,各药物血清组随着作用时间的延长抑制效果更明显,抑制效应呈时间依赖性,以中西医结合组药学血清作用48h组抑制作用最佳,抑制率达51.09%。 2.HE染色后,光镜下可见,对照组细胞贴壁生长,呈长梭形,大小比较均匀,核卵圆形居中,胞质清亮透明。药物血清组部分细胞由长梭形变成圆形,细胞核不规则,胞浆浓缩,染色质边集,浓缩药物血清组细胞。透射电镜下可见,经药物血清处理的人胃癌SGC-7901细胞变圆,微绒毛及突起明显减少,伪足消失,线粒体空泡化,核染色质凝集,可见调亡小体。凋亡细胞发生率与药物浓度呈正相关。DNA琼脂凝胶电泳检测可见活血行气方药物血清能诱导SGC-7901人胃癌细胞形成凝胶电泳特异梯状带,以流式细胞仪定量分析活血行气方药物血清作用48h后,在G1峰前出现凋亡峰中药组凋亡率为9.87±2.13%,西药组的凋亡率为48.24±1.32%,中西医结合组的凋亡率为47.65±2.47%。 3. P53基因是目前被最为广泛和深入研究的抑瘤基因之一,也是迄今为止所发现的突变频率最高和突变范围最广泛的抑癌基因,P53基因突变是胃癌发生发展的重要始动因素之一。Bcl-2基因是一种癌基因,其表达的Bcl-2蛋白是控制线粒体中致凋亡因子释放的主要调节因子,在维持细胞生理性分化、发育和细胞数量的动态平衡中具有重要作用。经蛋白质印迹(Western blot)法测定人胃癌SGC-7901细胞株经活血行气方药物血清处理后,P53、Bcl-2基因表达的变化。结果显示,对照组中P53、Bcl-2蛋白为中等表达,与对照组相比,中药组及中西医结合组中P53蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱(P0.05)。 4.经药物血清处理后,在光镜下见对照组Mg~2+-ATPase主要定位在细胞膜的内侧,黑色酶反应颗粒大小均匀,密度大,呈线状规则排列;G-6-Pase主要定位在细胞质内,酶反应颗粒粗大,排列密集,呈融合状;与对照组比较,各组Mg~2+-ATPase和G-6-Pase反应颗粒变小,数量减少,密度减低,有的为阴性。提示酶活性明显下降。 结论: 1.活血行气方药物血清对人胃癌SGC-7901细胞株在体外具有抑制增殖的作用。 2活血行气方药物血清对人胃癌SGC-7901细胞株具有诱导细胞凋亡的作用。 3.活血行气方药物血清可上调人胃癌SGC-7901细胞株P53基因蛋白表达水平,下调Bcl-2基因蛋白表达水平。活血行气方药物血清诱导人胃癌SGC-7901细胞株凋亡的机制可能是通过上调促凋亡基因P53表达,下调癌基因Bcl-2的表达实现的。 4.活血行气方药物血清具有降低人胃癌SGC-7901细胞株Mg~2+-ATP酶、G-6-P酶活性的作用。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 刘成,刘成海,刘平,徐列明,胡义杨;扶正化瘀方抑制大鼠贮脂细胞增殖的研究[J];中国中医药科技;1997年02期
2 黄费祥,贾正平;瑞香狼毒抗肿瘤作用实验研究进展[J];中国药房;2003年10期
3 许冬青,张旭,蔡文峰,许惠琴,王明艳;丹参药物血清保护血管内皮细胞分子机制研究[J];中成药;2005年02期
4 彭哲,王硕仁,李秋梅,牛福玲;解毒活血益气方药物血清对兔血管平滑肌细胞增殖及脂质过氧化的影响[J];中国医药学报;2004年06期
5 江和基;杨丽英;陈强;黄志坚;;复方茵芩制剂血清对小鼠体外肝细胞损伤的保护作用[J];福建农林大学学报(自然科学版);2008年01期
6 刘成海,王晓玲,刘平,刘成,谭英姿;扶正化瘀方及其拆方药物血清对肝星状细胞增殖及胶原表达的抑制作用(摘要)[J];中西医结合肝病杂志;1998年S1期
7 王晓玲,刘平,刘成海,刘成,顾宏图;含药血清药理法观察扶正化瘀方抗肝纤维化的配伍作用[J];中国实验方剂学杂志;1999年06期
8 马文军,刘江静,徐淑琴,丁克雄,赵剑芳,连秀珍,俞发荣;复方丹参药物血清对人BEL-7402细胞的抑制作用[J];中国临床康复;2005年34期
9 方步武;吴咸中;来丽娜;陈菲;刘俊红;李继坤;王民宪;崔志清;林秀珍;;大承气颗粒药物血清对小鼠肠上皮内淋巴细胞产生/分泌IL-2的作用[J];中国中西医结合外科杂志;2005年06期
10 刘建勋;韩笑;孙宇扬;;含药血清药理作用强度与体内给药的量效、时效关系研究[J];中国中药杂志;2006年10期
11 陈雪霞;李民;张旭;杨进;王灿晖;;麦冬、生地药血清对血管内皮细胞增殖的影响[J];工企医刊;2006年05期
12 戴晓明;张旭;蒋明;杨进;;养阴益气活血方药不同配伍对VSMC的影响[J];中医药学刊;2006年12期
13 苏征;方步武;吴咸中;;大承气颗粒药物血清增强小鼠肠上皮内淋巴细胞产生IL-2及IL-6的作用研究[J];中药药理与临床;2009年01期
14 李霞;付文艳;杨英;;中药药物血清抗肿瘤研究进展[J];畜牧与饲料科学;2009年10期
15 鲁玉辉;陈文元;;叶下珠复方对人肝癌HePG_2细胞增殖及细胞信号传导通路的影响[J];光明中医;2010年03期
16 张永进;方步武;;蒿鳖养阴软坚方药物血清对肝星状细胞的作用[J];中药药理与临床;2011年01期
17 杨志云;王丽;侯艺鑫;王宪波;;苦参碱含药血清对WB-F344细胞形态、增殖和Jagged1信号分子表达的影响[J];中国中医药信息杂志;2011年07期
18 李斌,董莉,章云,王振宜;生肌化瘀方对实验性大鼠创面肉芽组织成纤维细胞形态学的影响[J];中国中医基础医学杂志;2002年11期
19 吴亚云,程明亮,李宏,陆彤,耿晓霞;消瘢方对体外CCl_4损伤大鼠原代肝细胞保护作用的研究[J];世界华人消化杂志;2005年09期
20 赵宏利;张英蕾;马宝璋;;益气止血宁药物血清对离体子宫收缩影响的研究[J];中医杂志;2009年S1期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 蔡玉文;王旭;王玥;郝宏党;;中药药物血清对肿瘤细胞酶活性作用的实验研究[A];中国解剖学会2011年年会论文文摘汇编[C];2011年
2 郭顺根;戴敏;谢艳爽;牛建昭;赵景民;赵丽云;赵福建;;复方鳖甲软肝方对肝星状细胞细胞周期影响机制的研究[A];第十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2004年
3 李萍;胡国龄;刘洪波;谭德明;;抗纤二号药物血清对活化型肝星状细胞的影响[A];中华医学会第十二次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2005年
4 张士云;王涛;王彦云;朱瑞丽;莫爵飞;潘菊华;刘起华;高磊;汪莲;刘贵建;;通络散结丸药物血清抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的机制研究[A];第十二次全国中医、中西医结合乳房病学术会议论文集[C];2011年
5 戴敏;郭顺根;谢艳爽;牛建昭;赵景民;赵丽云;赵福建;;复方鳖甲软肝方药物血清干预TGF-β_1影响HSC增殖作用的实验研究[A];第十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2004年
6 房澍名;姚希贤;;拆方益肝康及药物血清对肝星状细胞TGF-β_1及受体影响的研究[A];中国中西医结合第十九次全国消化病学术会议暨国家级中西医结合消化疾病新进展学习班论文汇编[C];2007年
7 袁超;沈洪;郑凯;施瑞华;张国新;郝波;朱萱萱;;黄芪、莪术药物血清对胃癌MKN45细胞株增殖、凋亡的影响[A];中华中医药学会脾胃病分会第十九次全国脾胃病学术交流会论文汇编[C];2007年
8 赵英恒;何兴祥;;复方利肝冲剂药物血清对肝星状细胞NF-kB结合活性的抑制作用[A];中国中西医结合学会第十三次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2001年
9 宣红萍;陶艳艳;刘成海;;扶正化瘀方药物血清对肝星状细胞整合素信号转导的影响[A];第十三次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2004年
10 王凌;王文君;王玉东;李大金;;补肾宁心方药效机制研究 第二部分 补肾宁心方对围绝经期成骨细胞-免疫网络的调控作用[A];全国第七届中西医结合妇产科学术会议论文及摘要集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 曲婷婷;活血行气方药物血清对人胃癌SGC-7901细胞株作用的实验研究[D];辽宁中医药大学;2011年
2 房红梅;拆方益肝康及药物血清对肝星状细胞活化增殖、胶原代谢及细胞因子影响的研究[D];河北医科大学;2004年
3 彭哲;PTA术后益气活血解毒方药物血清对兔VSMC在RS中作用的研究[D];北京中医药大学;2004年
4 冉云;正肝方影响肝癌前病变AFP依赖机制的研究[D];湖北中医药大学;2013年
5 田元祥;醒脑启智胶囊及药物血清对反复脑缺血再灌注小鼠及嗜铬细胞瘤PC12细胞的影响[D];河北医科大学;2004年
6 邢晓静;健脾理气方药物血清对人肝癌HepG2细胞株干预的机制研究[D];辽宁中医药大学;2008年
7 吕涛;“益肝康”单味药对肝星状细胞活化TGF-β1信号通路的影响及其有效成分分析[D];河北医科大学;2006年
8 王永;三七总皂苷对内毒素休克大鼠心肌保护作用机制的研究[D];北京中医药大学;2007年
9 章亭;康氏抗纤颗粒抗肝纤维化大鼠的疗效和机理的研究[D];北京中医药大学;2005年
10 许浪;益气养阴散结方对人体肺癌细胞增殖与凋亡影响的研究[D];湖北中医学院;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张亚伟;金叶败毒颗粒药物血清抗人巨细胞病毒感染的体外实验研究[D];华中科技大学;2010年
2 胡彬雅;益气解毒颗粒影响鼻咽癌细胞HNE1增殖和凋亡活力的实验研究[D];湖南中医药大学;2005年
3 李霞;瑞香狼毒药物血清诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的分子机制研究[D];内蒙古农业大学;2010年
4 邵永斌;中药G-免疫增强剂复方和单味中药多糖的免疫增强作用研究[D];石河子大学;2005年
5 吕涛;丹参等活血化瘀中药药物血清对大鼠肝纤维化HSC作用研究[D];河北医科大学;2003年
6 杨兆荣;桂苓消异方含药血清对子宫内膜异位症在位内膜细胞形态学及分泌IL-6,IL-8影响的研究[D];扬州大学;2009年
7 戴敏;复方鳖甲软肝方药物血清干预TGF-β_1影响大鼠离体肝星形细胞活化的研究[D];北京中医药大学;2004年
8 鹿见香;祛银颗粒对KGF诱导的HaCaT细胞增殖及分泌TNF-α的影响[D];北京中医药大学;2011年
9 张立燕;解毒活血颗粒药物血清对ASO患者血管平滑肌细胞表型变化的影响[D];山东中医药大学;2005年
10 丁爱娟;血竭含药血清对子宫内膜异位症在位内膜间质细胞凋亡和分泌6-keto-PGF_(1α)、TXB_2的影响[D];扬州大学;2009年
中国重要报纸全文数据库 前8条
1 刘建勋 韩笑 孙宇扬;双参通冠方血清药理研究有新发现[N];中国医药报;2006年
2 张中桥;活血化瘀中药能抑制白血病细胞生长[N];中国医药报;2006年
3 ;复方鳖甲软肝方可抑制细胞核因子κB活化[N];中国中医药报;2005年
4 ;复方鳖甲软肝方对肝星形细胞中细胞核因子κB活化的影响[N];中国中医药报;2005年
5 衣晓峰;李建辉;中药治疗骨质疏松为何疗效好 细胞学水平研究有答案 [N];中国医药报;2002年
6 魏开敏;肾功能减退者的用药[N];中国医药报;2001年
7 本报记者 赵晖;中医药现代化的开拓者[N];天津日报;2011年
8 陈少东 周海虹 李雪梅 林锦培 范应 徐维佳;揭开茵陈蒿汤抗脂肪肝的秘密[N];中国医药报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978