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利用重组F26G实现呋甾皂苷向螺甾皂苷生物转化的研究

王亮  
【摘要】: 本文对重组F26G(Furostanol glycoside 26-O-β-glucosidase)实 现的呋甾皂苷向螺甾皂苷生物转化进行研究。用BamHⅠ和XbaⅠ两 种限制酶酶切质粒pKG27,获得了含有编码F26G cDNA的基因 片段,将其重组到表达载体pET-22b上,经酶切及PCR的筛选和 确认,证明编码F26G的cDNA成功的克隆到表达载体上,构建 了表达质粒pET-22b-F26G。 摸索了呋甾皂苷、螺甾皂苷的检测方法,并确立了TLC及 HPLC检测条件,以此为基础,确立了体外酶转化反应的条件, 成功的检测到了重组菌表达产物的F26G酶活性,证明构建的表 达质粒成功的表达出F26G酶。 对重组菌的培养基pH值、培养时诱导物的加入时间及诱导 时间等条件进行了考察,确立了高表达的菌体培养条件。 利用重组菌表达的酶对来源于不同种植物的一系列不同结构 的呋甾皂苷进行催化转化,利用TLC、HPLC及ESI-MS等方法 对酶反应检测、分析,考察重组F26G酶对底物的选择性及催化 能力。放大酶反应,对转化产物进行了制备及纯化,确认其结构, 对呋甾皂苷、螺甾皂苷间的转化机制进行了探讨。


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1 王亮,游松,蒋雅红,姚新生;利用重组F26G酶实现呋甾皂苷向螺甾皂苷的体外生物转化[J];中国药物化学杂志;2001年06期
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