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银杏叶毛细管电泳及色谱联用技术指纹图谱研究

马欣  
【摘要】: 银杏叶为近年来国内外中药(植物药)研究开发的热点之一。本研究采用毛细管区带电泳(CZE)、高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱联用(LC-MS)和毛细管电泳-质谱联用(CE-MS)等不同分析方法,从含量测定、成分分析和指纹图谱三个侧面对银杏叶及银杏叶提取物进行分析研究,为其质量控制提供一定依据。 一、银杏叶中两种黄酮苷类化合物的含量测定 采用均匀设计法优化了CE的缓冲溶液条件,并比较了分离温度的影响,确定最佳分离条件:以500mmol·L~(-1)硼酸-50mmol·L~(-1) Tris-15%(v/v)甲醇(pH 8.5)为缓冲溶液,运行电压30.0kV,分离温度25℃,测定波长254nm。芦丁在0.022~0.353mg·mL~(-1)范围内线性良好,r=0.9994,平均回收率98.3%,精密度RSD=2.1%(n=5);异槲皮苷在2.12×10~(-3)~63.6×10~(-3)mg·mL~(-1)范围内线性良好,r=0.9991,平均回收率98.4%,精密度RSD=2.5%(n=5)。应用CE法测定不同季节和不同树龄银杏树的银杏叶,结果发现四月芽期树龄小的银杏树的银杏叶中芦丁和异槲皮苷含量最高,一定程度上反映了银杏叶中黄酮类化合物含量的季节变化规律。本实验还利用HPLC法测定了银杏叶和银杏叶提取物中芦丁和异槲皮苷的含量。以0.5%甲酸-乙腈为流动相,采用Zorbax SB C_(18)柱,二元梯度洗脱,有效分离了大部分黄酮苷类化合物。经t检验,CE与HPLC两种分析方法的测定结果95%水平上无显著性差异。 二、LC-MS/MS法和CE-MS/MS法分析银杏叶中活性成分 建立了同时分析银杏叶中两类主要活性成分的LC-MS/MS法,通过 沈阳药科大学硕士学位论文 摘 要 与现有对照品的色谱行为、紫外光谱和质谱图对照,鉴别和推测了银杏 叶中大部分黄酮类和内酯类化合物,并建立了其二级质谱谱库,有利于 中药指纹分析中已知化合物的确认和未知化合物的快速检索。 利用CE-MS恤S法对银杏叶提取物的成分分析进行了探索,优化了 以挥发性盐为电解质的缓冲溶液系统,考察了不同夹套液对离子化效率 的影响。通过与LC-MSMS法的质谱图对照,检出了7种黄酮类化合物, 为CE-MS/MS r应用于天然产物的分析研究进行了有意义的尝试。 三、银杏叶提取物的指纹图谱的研究 本研究首次将CE法和 LC-MS法应用到银杏叶提取物的指纹图谱研 究,分别建立了银杏叶提取物的毛细管电泳指纹图谱和质谱总离了流色 谱指纹图谱。利用“指纹图谱相似度软件”(沈阳药科大学计算机中心), 以银杏叶标准提取物(EGb)761为共有模式,以芦丁为内参比峰,计算 了9个**b样品与**b乃1的相似度,初步认为相似度小于0.8的样品 与 EGb 76差异显著。对三种不同分析力法的相似度结果进行了比较和 讨论。


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