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补骨脂抗氧化与抗癌活性成分的研究

郭江宁  
【摘要】: 本文采用OSI方法,选择常见中药为主要研究对象,进行天然抗氧化剂的筛选。抗氧化活性的强弱,主要以加入抗氧化剂前后,底物氧化诱导期(IP)长短为指标,通常用抗氧化保护系数(Pf)来表示。考察它们对猪油抗氧化活性的影响,以期获得抗氧化活性较强的中药。在所研究的65种中药中,对底物猪油有抗氧化作用的中药有9种,其由强至弱的顺序依次为:迷迭香、补骨脂、肉豆蔻、甘草、五倍子、诃子、丹参、丁香(Pf>2)。其中补骨脂的抗氧化活性强于合成抗氧化剂BHA、BHT和天然抗氧化剂(α-tocopherol,是常用的中药。由于补骨脂在抗氧化方面的报道甚少,故本文对其进行了深入研究。 本文系统地查阅了补骨脂化学成分及其生物活性研究的文献,在进行文献综述的基础上,采用抗氧化活性跟踪手段,通过柱色谱方法对具有抗氧化作用的超临界CO_2提取物、石油醚提取物和氯仿提取物进行活性成分的分离纯化工作,结合理化性质和波谱分析,从补骨脂中分离并鉴定了6个单体化合物,它们是:补骨脂酚(bakuchiol)、异补骨脂素(isopsoralen)、补骨脂素(psoralen)、补骨脂双氢黄酮(corylifolin)、补骨脂异黄酮(corylin)、补骨脂定(psoralidin);同时采用OSI方法测定了6个单体化合物的抗氧化活性,并与BHT和α-tocopherol比较,初步探讨了抗氧化机理。结果表明,补骨脂酚、补骨脂双氢黄酮、补骨脂异黄酮、补骨脂定具有较强的抗氧化活性,尤其是补骨脂定在0.02%和0.04%浓度时的抗氧化活性强于同浓度的BHT。而补骨脂素和异补骨脂素在0.02%和0.04%浓度时无明显的抗氧化活性。其抗氧化活性的强弱为:补骨脂定>BHT>α-tocopherol>补骨脂酚>补骨脂双氢黄酮>补骨脂异黄酮>补骨脂素~异补骨脂素。这些结果说明:抗氧化作用除了与化合物中酚羟基的数目有关外,更重要的是与酚羟基在化合物中的位置有关。 沈阳药科大学博士学位论文 摘要 本文首次在动物体内研究了补骨脂的抗氧化和抗衰老作用,并对其进行了系 统研究。实验测定了补骨脂提取物对小鼠血清中超氧化物岐化酶(SOD)活力与 丙二醛(MDA)含量的影响;以a一toc叩herol为阳性对照,观察补骨脂对小鼠常 压缺氧、游泳时间、高温环境下存活时间和对果蝇寿命的影响。结果表明,补骨 脂不同提取物三个剂量组(29·Kg一,、19·Kg一,、0.59·K岁)均能提高小鼠血 清中SOD活力,降低 MDA含量,并可显著延长常压缺氧时间、游泳时间、耐高 温时间,延长果蝇的平均寿命、半数死亡时间和最高寿命。 本文研究了补骨脂中活性成分在体外的抗癌作用,同时考察了溶剂乙醇和立 甲基亚矶对细胞增殖的影响,并通过MTT试验对其抑制BGC一823、U937、Du一145、 A一549、Bel一7402和Eca一1 09肿瘤细胞的增值进行了深入研究。结果发现,在细 胞培养液中加入补骨脂素和异补骨脂素48小时后,肿瘤细胞增值各不相同,对 上述肿瘤细胞IC5o依次为5.820林g/mL、32.64林g/mL、29.83协g/mL、48.81林g/mL、 23 .85林g/mL、100卜g/mL;100林g/mL、59.53林g/mL、69.19卜g/mL、100林g/mL、 39.74林g/mL、100林创mL。它们对不同肿瘤细胞的抑制作用分别为BGC一823 Bel一7402Du一145U937A一549Eea一109和Bel一7402U937Du一145 A一549一Eca一109一BGC一823。表明两种化合物对肿瘤细胞株抑制作用具有一定的 选择性。 为进一步验证体外实验结果,本文选择体外抑瘤活性结果突出的胃癌为模 型,以5一Fu和卡莫氟为阳性对照药,进一步研究了补骨脂素和异补骨脂素对3,4- 苯并花诱导的前胃癌小鼠模型的体内抗癌作用,通过组织切片观察抗癌作用。实 验结果表明,补骨脂素120 mg·Kg一‘剂量组体内抑瘤有显著性差异,补骨脂素 60 mg .Kg一,剂量组和异补骨脂素36 mg .Kg一’剂量组均具有不同程度的抗癌作用。 同时,小鼠的自然体重增加和各脏器占体重之比无明显影响,可以认为在本实验 剂量范围内,上述药物均对小鼠无明显毒性反应。组织切片观察结果显示补骨脂 素和异补骨脂素实验组小鼠前胃生长的乳头状瘤较空白对照组小,说明它们在体 内也具有一定的抗癌作用。 本文对补骨脂抗氧化和抗肿瘤活性进行了较系统的研究。结果表明补骨脂具 有较强的抗氧化活性,其中的活性成分在动物体内与体外实验中也证明具有一定 沈阳药科大学博士学位论文 摘要 的抗癌作用。这对于寻找新型高效、低毒的天然抗氧化剂和进一步系统研究和开 发利用中药补骨脂,充分肯定其药用价值提供了一定的科学依据。


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