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乙醇对小鼠纹状体抗坏血酸与一氧化氮释放相关性与机理

颜培钢  
【摘要】: 急性应用乙醇(ethanol)对中枢神经系统产生广泛而复杂的影响。研究表明,急性腹腔注射乙醇显著促进大鼠纹状体抗坏血酸(Ascorbic acid,AA)的释放,同时显著降低纹状体细胞外总亚硝酸盐(nitrites,NOx~-)水平。许多研究显示,乙醇、AA与NO之间存在复杂的关系。本论文研究了乙醇引起小鼠纹状体AA与NO释放变化之间的相关性,以及可能的作用机理。 应用脑微透析技术结合HPLC-ECD系统检测AA与谷氨酸(Glutamate,Glu)含量,应用酶标仪检测NOx~-含量。实验结果表明腹腔注射乙醇(2.0,4.0 g/kg,i.p.)剂量依赖性促进纹状体AA的释放。腹腔注射(70.0,140.0 mg/kg)或纹状体内透析应用(10~(-4),10~(-3) mg/ml)一氧化氮合成酶(Nitric oxide synthase,NOS)底物L-精氨酸对纹状体基础与乙醇诱导的AA释放无影响。纹状体内透析应用(10~(-4),10~(-3) mg/ml)一氧化氮合成酶抑制剂L-NAME显著降低纹状体基础AA释放,并显著拮抗乙醇的促AA释放作用。腹腔注射(70,140 mg/kg)L-NAME对纹状体基础以及乙醇诱导的AA释放无影响。提示,L-NAME难以有效通过血脑屏障。纹状体内透析应用(10~(-4),10~(-3) mg/ml)一氧化氮(Nitric oxide,NO)供体硝普钠(SNP)显著降低纹状体基础AA释放,然而对乙醇诱导的AA释放无显著影响。实验结果提示,一氧化氮能神经系统并不直接参与乙醇促进纹状体AA释放作用的调节。L-NAME对乙醇促AA释放的拮抗作用可能部分是通过调节细胞外Glu水平实现的。 外源性皮下注射AA(35,70 mg/kg)剂量依赖性持续升高小鼠纹状体细胞外AA水平,对基础NOx冰平无影响.乙醇并不能进一步促进外源性AA引起的纹状体AA水平的升高,外源性AA剂量依赖性拮抗乙醇的降低纹状体NOx~-水平作用。实验结果提示,细胞内还原型AA有利于维持神经型NOS活性,并参与乙醇抑制神经型NOS作用的调节,推测AA的这种作用是通过维持细胞内还原 沈阳该纷斗牛大月六仁卜d二论文 摘要 型四氢叶酸(totra勿drofoli。。cid,FH4)有效水平实现的。 本论文进一步考察了葡萄籽提取物中主要的抗氧化成份儿茶素、原花青素与 白琴芦醇(50,100 mg/kg)对乙醇降低小鼠纹状体Nox冰平的影响。分别腹腔注 射三种葡萄籽提取物,对纹状体基础AA与Nox冰平无影响,但剂量依赖性加 强乙醇的促AA释放作用,显著延长AA释放时程。儿茶素显著拮抗乙醇降低小 鼠纹状体Nox冰平的作用,而原花青素与白蔡芦醇对乙醇的作用仅显示轻微的 影响。本实验结果表明,葡萄籽提取物中一些抗氧化成份可影响乙醇对小鼠纹状 体Nox冰平的调节作用。 谷氨酸能神经系统与NOS活化和AA释放关系密切,本论文考察了Ghi受 体对乙醇诱导的小鼠纹状体AA与NOx水平变化的影响。结果表明,脑室注射 Ghi(1,10 nM)显著促进纹状体AA与Nox冰平的升高,加强乙醇的促AA释 放作用,增强AA变化幅度,并拮抗乙醇的降低Nox冰平作用。脑室注射Glu 三种离子型受体激动剂NMDA、AMPA与KA(1,10 nM)分别不同程度地升高 纹状体AA与Nox冰平。NMDA显著加强乙醇的促AA释放作用,拮抗乙醇的 降低Nox水平作用,而AMRA或KA对乙醇的作用无显著的影响。NMDA对乙 醉的影响可被NMDA受体拮抗剂MK名01所取消。实验结果表明,Glu参与乙 醉促进纹状体AA释放与降低Nox冰平作用的调节,该作用主要是通过NMDA 受体实现的。


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