收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

紫杉醇长循环免疫脂质体的制备和评价

杨涛  
【摘要】: 由于紫杉醇极低的溶解度,临床上将其增溶在聚氧乙烯蓖麻油和无水乙醇(50:50,v/v)的混合物中用于治疗卵巢癌,乳腺癌,非小细胞肺癌等。然而,该载体会引起许多毒副作用,包括过敏反应,神经毒性,影响了它的临床应用。本论文试图采用脂质体技术将紫杉醇包封在脂质体中以提高紫杉醇的含量,并改善紫杉醇脂质体的稳定性。首先,在紫杉醇普通脂质体的研究过程中,考察了水化介质、胆固醇含量、磷脂含量、药物含量及不同类型的磷脂对紫杉醇脂质体的包封率的影响。结果显示,水化介质中加入3%(v/v)Tween-80能够提高脂质体的稳定性和磷脂薄膜的水化速度。控制磷脂S_(100)PC的浓度为10%(w/v),磷脂与胆固醇的摩尔比为90:10,紫杉醇在处方中为3.5mg/mL,可将紫杉醇在水中的溶解度从大约1μg/mL提高到3.39mg/mL。在水化介质中加入5%(v/v)PEG 400,能够进一步提高脂质体的包封率到89.26%,并能提高紫杉醇在脂质体冻干粉末中的含量。为了进一步改善紫杉醇脂质体的稳定性,将脂质体溶液进行冷冻干燥。蔗糖(蔗糖与磷脂的摩尔比例为2.3:1)作为冻干保护剂,能够保持脂质体在冷冻干燥过程中的完整性。细胞毒性研究显示,紫杉醇脂质体对人的乳腺癌细胞MDA-MB-231的细胞毒性与Taxol~(?)相似。 在研究普通紫杉醇脂质体的基础上,为了提高脂质体在体内的循环时间,制备了长循环脂质体。水化介质中加入3%(v/v)Tween-80能够提高紫杉醇在长循环脂质体溶液中的含量到3.28mg/mL,能够满足紫杉醇的临床需求(0.3~1.2 mg/mL)。在冷冻干燥过程中蔗糖的加入提高了长循环脂质体的稳定性,为脂质体的长期储存提供了条件。体外释放研究显示紫杉醇从长循环脂质体中的释放是一个缓慢的过程,24h仅仅释放了33%,明显低于普通脂质体(24h释放了55%)和Taxol~(?)溶液(24h内完全释放)。体外细胞毒性试验显示,经过24h培养,长循环脂质体对MDA-MB-231和SK-BR-3两种人的乳腺癌细胞的细胞毒性比Taxol~(?)弱,但是经过72h的培养,两者显示出相似的细胞毒性。 本论文采用后插入法成功的制备了靶向人上皮细胞增长因子2(HER2)高度表达的乳腺癌的长循环免疫脂质体。硫化的抗体能够成功的连接到连接磷脂的远端,并插入到长循环脂质体的磷脂双分子层中。Sodium dodecyl sulfate—polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE)分析显示抗体赫赛汀(Herceptin)在整个免疫脂质体的制备过程中能够保持结构完整性。同时考察了Herceptin的生物活性,游离的抗体,硫化抗体和连接在免疫脂质体上的抗体对HER2高度表达的乳腺癌细胞(SK-BR-3和BT-474)显示出相似的细胞毒性,确认了生物活性的良好保持。体外释放研究显示,紫杉醇从长循环免疫脂质体中的释放与其从长循环脂质体中的释放无明显的差异(p>0.05),是一个缓慢的过程,24h仅仅释放了36%。共聚焦激光扫描显微镜研究确认了Herceptin能够使长循环免疫脂质体通过受体介导的内吞进入到HER2高度表达的细胞的内部,然而对于长循环脂质体却不能发现任何的荧光标记。对于BT-474和SK-BR-3细胞,Herceptin与游离的紫杉醇或者脂质体包封的紫杉醇的细胞毒性具有加合作用;长循环免疫脂质体显示出比Herceptin和长循环脂质体联合应用更加强的细胞毒性。通过细胞摄取研究发现,在37℃和HER2高度表达的细胞条件下,通过受体介导的内吞,长循环免疫脂质体显示出比长循环脂质体明显高的细胞摄取率;然而在4℃和HER2低表达的细胞则无显著的差异;该结果与共聚焦激光扫描显微镜研究的结果一致。 四种制剂在大鼠体内的药物动力学结果表明,长循环脂质体在体内的循环时间最长,其次为长循环免疫脂质体,再次为普通脂质体,最后为市售紫杉醇剂型Taxol~(?)。以市售紫杉醇剂型Taxol~(?)为参比制剂,紫杉醇普通脂质体的相对生物利用度为160%;长循环脂质体和长循环免疫脂质体的相对生物利用度分别为712.75%和390.83%。接着在MDA-MB-231和BT-474两种动物模型上考察了游离的紫杉醇及紫杉醇脂质体的体内组织分布,对于MDA-MB-231动物模型,长循环脂质体因为拥有最长的体内循环时间,从而在肿瘤部位具有最高的药物累积量,其次为长循环免疫脂质体,再次为普通脂质体,最后为Taxol~(?)。对于BT-474动物模型,长循环免疫脂质体在肿瘤部位的累积量与长循环脂质体无明显差异,再次为普通脂质体,最后为Taxol~(?)。 通过建立MDA-MB-231和BT-474两种人的乳腺癌异种移植裸鼠模型,以生理盐水为对照,研究了Taxol~(?),紫杉醇普通脂质体,长循环脂质体和长循环免疫脂质体的药效学。对于MDA-MB-231裸鼠模型,长循环脂质体和长循环免疫脂质体抗肿瘤效果好,两者间疗效无明显的差异;其次为普通脂质体,再次是Taxol~(?)。对于BT-474裸鼠模型,长循环免疫脂质体的疗效最好,其次为长循环脂质体,再次为普通脂质体,最后为Taxol~(?)。药效学试验结果显示了所制备的紫杉醇脂质体能够显著的改善紫杉醇的抗肿瘤效果,是一种有前途的紫杉醇载体系统。 综上所述,本文采用脂质体技术将紫杉醇包封在脂质体中,通过Tween-80的应用,极大地提高了紫杉醇在脂质体溶液中的含量(>3mg/mL),通过冷冻干燥技术将脂质体冻干,提高了脂质体的稳定性。通过插入聚乙二醇化的磷脂,将脂质体在大鼠体内的平均滞留时间从普通脂质体的3.15h提高到18.75h,延长了脂质体在体内的循环时间。将Herceptin连接到长循环脂质体上后,使其能够主动靶向到HER2高度表达的乳腺癌,药效学研究确认了它能够显著提高紫杉醇的治疗效果,达到了本实验的设计目的。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 胡国武,元英进,王传贵;稀土化合物影响红豆杉细胞紫杉醇释放行为研究[J];天津农业科学;1998年01期
2 余文鳌,梅兴国,柯铁,陈菁,刘幸福;紫杉醇侧链的合成[J];厦门大学学报(自然科学版);1999年S1期
3 张志强,苏志国;紫杉醇吸附制备动力学研究[J];化学工程;2002年05期
4 周浩然,王佳祥,梁淑敏,彭丽萍;高效液相色谱法测定野生东北红豆杉浸膏中紫杉醇的含量[J];化学与粘合;2002年04期
5 胡凯,何颖,祝顺琴,谈锋,唐克轩;红豆杉细胞悬浮培养生产紫杉醇研究进展[J];天然产物研究与开发;2003年05期
6 吴江;国内紫杉醇制剂市场分析[J];医药世界;2003年08期
7 梁敬钰;;紫杉醇研究现状“曝光”[J];中国林业产业;2005年12期
8 张德和;;新抗癌药紫杉醇(Taxol)[J];化学通报;1993年08期
9 金人一;从树皮提取紫杉醇难以长期持续[J];生物技术通报;1994年04期
10 张志强,苏志国;正相和反相柱层析组合分离纯化紫杉醇[J];生物工程学报;2000年01期
11 阎家麒,刘虹,王九一,赵敏;东北红豆杉原料中紫杉醇的提取及测定[J];中国医药工业杂志;1994年10期
12 康民;瑞良;;抗癌神药紫杉醇[J];绿色大世界;1996年01期
13 张志强,苏志国;氧化铝层析从云南红豆杉植物中转化提取紫杉醇[J];天然产物研究与开发;2000年03期
14 周忠强,臧新,胡国斌,梅兴国;紫杉醇的分离纯化及其检测[J];广州化学;2002年04期
15 鲁旭东,刘华英;细胞培养及基因工程生产红豆杉紫杉醇的研究进展[J];生物学教学;2004年11期
16 ;利用稀土促进抗癌药物紫杉醇合成技术[J];稀土信息;2002年12期
17 刘长波,高瑞昶;紫杉醇给药研究进展[J];天津化工;2003年03期
18 祝顺琴,谈锋,唐克轩;紫杉醇提取纯化技术研究进展[J];中国生化药物杂志;2004年01期
19 马桂蕾;宋存先;韩锐;付招娣;;带有微孔结构紫杉醇微球制备及其在小鼠体内抗肿瘤活性研究[J];生物医学工程与临床;2006年S1期
20 ;高分子紫杉醇键合药研究获新进展[J];现代科学仪器;2010年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黎飒;朱贻盛;;乳腺癌对紫杉醇抗药性的研究进展[A];全国中医药科研与教学改革研讨会论文集[C];2000年
2 时俊锋;杨楠;胡美铃;应葳;孙玉洁;;ER通过上调MDR1基因表达增强MCF-7乳腺癌细胞对紫杉醇的抗性[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
3 叶敏;朱珠;傅强;李大魁;;大鼠肝药酶活性改变对紫杉醇药物动力学的影响[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
4 康春生;任玉;原续波;浦佩玉;周旋;王广秀;韩磊;贾志凡;;反义微小RNA-21与药紫杉醇共作用抑制胶质瘤的生长[A];2009医学前沿论坛暨第十一届全国肿瘤药理与化疗学术会议论文集[C];2009年
5 吕辉;文继舫;吴晓英;;REST在乳腺癌中的功能研究[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年
6 李云涛;史立波;李海平;范忠林;任曙光;;睾丸酮对乳腺癌MCF-7细胞株生长影响的研究[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年
7 李涛;陈正望;;炎性多肽Daintain/AIF-1在乳腺癌发生发展中的作用[A];肿瘤病因学研究与中西医结合肿瘤综合诊疗交流研讨会论文集[C];2009年
8 胡晨;陈彬;王越;陈先华;;乳腺癌中IGF信号途径及其抑制剂研究进展[A];重庆市生物化学与分子生物学学术会议论文摘要汇编[C];2009年
9 谢英;吕占军;段肖翠;侯洁;韩丽枝;王秀芳;;α-生育酚琥珀酸酯对乳腺癌细胞中Bcl-2家族蛋白表达的影响[A];河北省免疫学会第六次免疫学大会资料汇编[C];2010年
10 马琼;裘秀春;Wei Wang;范清宇;Shi Ke;;靶向IL-11Rα的特异性造影剂在乳腺癌成像中的应用[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 丁勇;紫杉醇诱导成骨肉瘤细胞凋亡及Caspase-6基因对成骨肉瘤细胞的凋亡诱导作用[D];第四军医大学;2001年
2 郝星;卵巢癌化疗耐药与纺锤体检测点功能完整性的相关性研究[D];华中科技大学;2010年
3 武晓静;MSCs修复血管内膜及对平滑肌部分生物学行为的影响[D];第三军医大学;2004年
4 仓顺东;异硫氰酸苯乙酯与紫杉醇协同抗乳腺癌细胞的作用及其机制的研究[D];郑州大学;2010年
5 聂秀青;拉帕替尼诱导HER2阳性乳腺癌细胞凋亡机制及其与ABT-737的协同抗肿瘤作用[D];复旦大学;2010年
6 顾海宁;紫杉醇AB环骨架和喹诺酮等药物的绿色合成研究[D];浙江大学;2006年
7 孙西洋;新型纳米复合载体的构建及其介导NK4基因在治疗乳腺癌中的应用[D];中国医科大学;2010年
8 张莹;TSG101对乳腺癌细胞的作用及与HIF-1α、MAPK/ERK信号通路的关系[D];中国医科大学;2008年
9 王雄文;三苯氧胺联合阿霉素、顺铂及紫杉醇抑制MCF-7细胞株增殖的实验研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
10 耿长新;多烯紫杉醇在体内外对人肝细胞肝癌抑制生长及放射增敏实验研究[D];复旦大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郭君兰;雌激素受体α66介导乳腺癌细胞对紫杉醇耐药的研究[D];浙江大学;2011年
2 董硕;双环醇联合化疗对人乳腺癌细胞株MCF-7、T47D生长和凋亡的影响[D];天津医科大学;2008年
3 张秋影;紫杉醇与抗HER2单抗偶联及其体外抗肿瘤作用的研究[D];吉林大学;2009年
4 王稣佳;有丝分裂检查点蛋白BubR1在乳腺癌细胞发生紫杉醇耐药中的作用及其机制研究[D];重庆医科大学;2011年
5 杨春蓉;PDTC联合紫杉醇对人乳腺癌细胞增殖侵袭能力的影响及其机制探讨[D];重庆医科大学;2010年
6 张永亮;Twist和耐药相关蛋白在乳腺癌中的表达及紫杉醇耐药MCF-7细胞株的差异蛋白质组分析[D];泸州医学院;2010年
7 李军;紫杉醇对自体移植静脉内膜重构作用的研究[D];中国医科大学;2002年
8 于亮;TWIST在紫杉醇诱导喉癌Hep-2细胞凋亡中的作用研究[D];山东大学;2010年
9 陈超;G6PD在诱导合成紫杉醇中的作用及其抗氧化机理研究[D];华中科技大学;2004年
10 林青;白术内酯Ⅰ对紫杉醇诱导的人卵巢癌细胞存活素survivin表达的拮抗作用及促凋亡作用[D];成都中医药大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 和龙;“低价紫杉醇”背后的隐患[N];医药经济报;2006年
2 ;紫杉醇对人胆管癌RBE细胞凋亡及细胞外信号调节激酶表达的影响[N];中国医药报;2003年
3 过国忠;红豆攻克紫杉醇产业化难题[N];科技日报;2007年
4 ;市场前景巨大的植物抗癌药“紫杉醇”[N];云南经济日报;2003年
5 昆仑证券;G 华立——青蒿、紫杉醇、工业大麻[N];证券日报;2006年
6 徐铮奎;紫杉醇市场饥渴[N];医药经济报;2008年
7 记者 张玲娜;紫杉醇命途多舛[N];医药经济报;2010年
8 秦峰;四医大采用手性催化技术合成紫杉醇[N];中国医药报;2007年
9 黄东临;紫杉醇原料工艺掣肘待破[N];医药经济报;2006年
10 第四军医大学西京医院 张中桥;针刺可控紫杉醇不良反应[N];健康报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978