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氯胺酮在人肝微粒体CYP450系统中的代谢

梁悦  
【摘要】: 本试验采用中国成人肝组织,通过差速离心法制备了肝脏微粒体,建立人肝微粒体体外温孵和NADPH再生体系,对氯胺酮进行体外代谢,研究其酶促反应动力学特征,测定药物体外代谢酶促反应动力学参数Vmax和Km来预测药物的体内代谢清除率,并分析不同人对氯胺酮代谢的差异。 由氯胺酮的体外酶促反应动力学特征可知,氯胺酮的N-去甲基反应显示出二相酶促动力学特征,结果显示,至少有二种酶系统对氯胺酮的N-去甲基代谢有作用。据Michaelis-Menten方程和Eadie-Hofstee制图法求得氯胺酮代谢为N-去甲基氯胺酮的酶动力学参数最大反应速率Vmax和米氏常数Km分别为5.44pmol/min/pmol P450,45.7μmol/L;12.01pmol/min/pmol P450,1875.3μmol/L,Vmax/Km值分别为119×10~(-6)ml/min/pmol P450,6.4×10~(-6)ml/min/pmol P450,得到体外总清除率(Cli)为26.2×10~(-6)ml/min/pmol P450,N-去甲基氯胺酮途径的清除率为20.1×10~(-6)ml/min/pmol P450,由此可知,氯胺酮氧化代谢后,80%生成N-去甲基氯胺酮。氯胺酮的N-去甲基代谢为主要的代谢途径。 根据10名损献者氯胺酮体外代谢氯胺酮的清除半衰期,经对数转换后进行方差分析,并进一步用双单侧t检验分析。结果表明,10名损献者对氯胺酮的代谢存在显著差异。 本试验应用CYP2C9的特异性抑制剂磺胺苯吡唑(1μM,10μM,100μM)检测人肝微粒体对氯胺酮的代谢的抑制性。结果表明在高浓度(100μmol/L)时可对氯胺酮N-去甲基代谢的抑制率达57.6%。同时又用CYP2C9的特异性底物甲苯磺丁脲(10μM)与氯胺酮共孵育,HPLC测定的结果为,氯胺酮的剩余浓度只比未加入甲苯磺丁脲时下降了15.8%,这也间接地说明了磺胺苯吡唑可能也为CYP286的抑制剂。CYP286可能是CYP450系统中代谢氯胺酮的主要酶,而CYP2C9在氯胺酮的代谢中的作用较小。 建立了反相高效液相色谱法(HPLC)测定氯胺酮及其主要代谢产物—N-去甲基氯胺酮的浓度的方法,利用乙腈沉淀肝微粒体中的蛋白后,采用Hypersil ODS2色谱柱(5μm,150mm×4.6mm),0.025mol/L KH_2PO_4-乙腈-三乙胺(54:46:0.02)作流动相,以1ml/min的流速洗脱,以布比卡因为内标定量氯胺酮及其代谢产物的浓度。本方法能满足氯胺酮浓度测定的需要,灵敏度高、简便、快速、可靠,方法的日内、日间精密度(RSD)均小于10%。


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