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灵芝化学成分和芝己胶囊的质量控制方法研究

赵佳  
【摘要】:灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr.)Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao,Xu et Zhang的干燥子实体。始载于《神农本草经》,列为上品,自古以来就被认为是一种有效的滋补强壮药。芝己胶囊是一种由赤芝单味药材制成的保健食品,具有调节免疫等保健作用。本文以传统中药灵芝与其制剂芝己胶囊为研究对象,提取分离得到灵芝三萜类对照品,建立了灵芝药材HPLC色谱指纹图谱,同时建立了灵芝和芝己胶囊三萜类指标性成分的HPLC同时含量测定方法,较系统地对灵芝药材与芝己胶囊制剂进行了质量控制方法研究。 本研究对赤芝干燥子实体的三萜酸类化合物进行了提取分离制备工艺研究。将赤芝干燥子实体的95%乙醇提取物,经二氯甲烷萃取,碱溶酸沉等步骤得到灵芝总三萜酸。此后,再进一步以反复硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析和制备液相等多种分离手段对灵芝总三萜酸成分进行系统分离、纯化。从中分离得到9个单体化合物。经理化性质、色谱法和各种光谱技术鉴定出了其中7个化合物的结构,分别为:灵芝酸DM、赤芝萜酮A、赤芝孢子内酯B、甲基灵芝酸A、灵芝酸D、灵芝酸A和灵芝烯酸A。 本研究建立了灵芝药材的HPLC指纹图谱方法。采用KromasilC18柱(250 mm X 4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.03%磷酸水溶液(B),梯度洗脱程序为:0-35 min,32%-33%A;35-38min,33%-37%A; 38-60 min,37%-40%A; 60-70 min,40%A,检测波长252 nm。对16批灵芝药材进行指纹图谱分析,并指认了其中4种成分。将所得数据进行聚类分析,采用类间平均链锁法(Between-groups linkage),以夹角余弦(Cosine)作为样品相似性的测度,将16批灵芝药材分为2类,其中Ⅰ类为推荐品,Ⅱ类为非推荐品。取Ⅰ类中11批药材,建立共有模式,采用药典委员会规定的色谱指纹图谱处理软件,计算各样品与共有模式间的相似度,确定相似度在0.90以上的灵芝药材为推荐药材。 本研究建立了灵芝药材和芝己胶囊中灵芝酸C2等4种灵芝三萜酸类成分的同时含量测定方法。采用KromasilC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.03%磷酸水溶液(B),梯度洗脱程序为:0-35 min,32%-33%A; 35-38 min,33%-37%A; 38-60 min,37%-40% A; 60-70 min,40%A,检测波长252 nm,流速为1.0 mL·min-1,柱温35℃。对16批灵芝药材中的4种活性成分灵芝酸C2、灵芝烯酸A、灵芝酸A和灵芝酸D进行了同时含量测定,其线性范围分别为5.0-50.0μg·mL-1(r=0.9999),7.2-72μg·mL-1(r=0.9999),11.67-116.7μg·mL-1(r=0.9999)和5.32-53.2μg·mL-1(r=0.9998);平均回收率分别为98.7%(RSD=1.8%),99.1%(RSD=2.1%),99.6%(RSD=1.9%)和98.5%(RSD=1.8%)。并且在同样的色谱条件下,测定了7批芝己胶囊中该4种灵芝三萜酸的含量,方法平均回收率分别为98.6%(RSD=1.8%),100.7%(RSD=2.2%),99.5%(RSD=2.1%)和99.0%(RSD=1.8%)。本方法简便、准确、重复性好,为灵芝和芝己胶囊质量评价提供了方法。


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