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厚朴中有效成分活性检测及结构鉴定

李慧  
【摘要】: 中药材厚朴为木兰科木兰属植物厚朴(Magnolia officinalis Rehd.et Wils.)或凹叶厚朴(M. officinalis Rehd.et Wils. var. biloba Rehd.et Wils.)的干燥干皮、根皮及枝皮。厚朴是我国的传统中药,具有多种药理活性,除了抗炎,抗衰老,抗氧化之外,还有广泛的抗菌活性。分离提取出厚朴中的有效抗菌成分,可为厚朴的深入研究奠定基础。 本实验以厚朴为原料,以金黄色葡萄球菌,肺炎克雷伯菌,大肠杆菌,耶尔森,巴士杆菌,李斯特菌,白色念珠菌,黑曲霉为供试菌,研究厚朴提取物对不同致病菌的抑制作用。结果表明,厚朴具有广泛的抗菌活性,其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强。金黄色葡萄球菌是最常见的化脓性球菌,也是肺部感染的主要致病菌。 利用高效液相色谱,高速逆流色谱等方法对厚朴中的有效抑菌成分进行分离,通过质谱、核磁共振分析,鉴定有效成分为厚朴酚(5,5-二烯丙基-2,2'-联苯二酚)与和厚朴酚(3,5-二-2-丙烯基-1,1'-联苯-2,4'-二酚),这两种成分对金黄色葡萄球菌都具有显著的抑制作用,最低抑菌浓度均为6.25μg/ml。本实验还研究了厚朴酚与和厚朴酚对金黄色葡萄球菌的抑菌机制。通过E-MAP(Epistasis Mini-Array Profiling)实验,发现厚朴酚与和厚朴酚都能对细菌细胞壁合成酶起抑制作用,从而达到抑菌的效果。 此外利用含wt-CFTR的表达质粒和一种对卤族元素碘离子高度敏感的荧光绿蛋白突变体EYFP-H148Q的表达质粒共转染Fischer大鼠甲状腺上皮细胞,得到稳定表达该蛋白的细胞系FRT/wt-CFTR/EYFP-H148Q-I152L。以此为筛选模型对厚朴中的组分进行筛选,筛选出的组分即为wt-CFTR氯离子通道激活剂。通过此实验发现,厚朴酚与和厚朴酚对wt-CFTR均具有明显的激活作用。 通过以上实验,推测厚朴中的有效成分可以通过激活通道、抑制炎症两种途径,对囊性纤维化病起到一定的治疗作用,此发现为该疾病治疗药物的研究提供一种新的化学结构基础。


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