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白假丝酵母几丁质酶cDNA的克隆及其在大肠杆菌和毕赤酵母中表达的研究

王书  
【摘要】: 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),以白假丝酵母(Candida albicans )总RNA为模板,扩增了几丁质酶(chitinase)的cDNA,重组到T7启动子控制下的表达载体pET23b及巴斯德毕赤酵母AOX1基因启动子控制下的表达载体pPIC3.5K,得到重组质粒pET23b-Chi及pPIC3.5K-Chi,并分别转化至大肠杆菌及巴斯德毕赤酵母。 SDS-PAGE分析表明,大肠杆菌表达菌株经1m mol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导4小时后,可表达一分子量为50KD的蛋白质。表达量约为20mg/L。对羟基苯甲酸酰肼(PAHBAH)法测定表明表达产物具有酶活性。 毕赤酵母经甲醇培养基诱导表达,检测破菌后上清液中的酶活性,并经SDS-PAGE检测,未发现外源蛋白的表达。


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