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莪术细胞悬浮培养,挥发油、多糖分离及其多糖生物学活性研究

罗红梅  
【摘要】: 摘要: 本研究建立了高产细胞悬浮系,是以莪术黄色、疏松愈伤组织细小颗粒为实验材料,将其接种于不同种类培养基,在不同碳源、氮源、激素种类及浓度、pH值、摇床转速、接种量、继代周期、光暗培养周期等不同条件下,培养一定时期后离心收获细胞,利用水蒸汽法测挥发油含量,苯酚—硫酸法测多糖含量。在挥发油的合成调控中,进行了乙酸铵、乙酸钾、泛酸钙等前体物质及能量物质ATPNa2添加的调控研究。确立了有利于莪术细胞生长及多糖和挥发油合成的最佳培养条件。结果表明,在最佳培养条件下,莪术细胞生长量是未优化培养对照组的1.82倍;悬浮细胞中多糖和挥发油含量大大提高了,分别可达45.53%和2.62%。其中多糖含量是饮片多糖含量的1.37倍,挥发油含量是未优化培养对照组的1.71倍。这方面的研究未见报道。本研究为工业化生产提供有意义的理论依据。 在莪术多糖的生物学活性研究中,采用热水浸提法从莪术饮片粉末浸提得粗多糖,经醇析、浓缩、DEAE-52纤维素柱层析,经蒸馏水、NaCl溶液梯度洗脱纯化后,利用琼脂糖凝胶电泳进行纯度检测,得一水洗脱组分,用该组分进行动物活体内抗肿瘤、免疫及体内外抗氧化研究。实验结果表明:莪术饮片多糖含量为33.12%。莪术多糖具有体内抗H22腹水癌的实体瘤作用,剂量为500mg?kg-1?day-1的抑瘤率高达54.87%,并能提高小鼠的淋巴细胞转化率、脾指数及血液中SOD酶活力;体外具有抗羟自由基氧化的能力,多糖浓度为100mg/mL时,对羟自由基的清除率达36.56%。莪术多糖可能是通过提高小鼠的免疫力及抗氧化能力的途径来抑制H22肿瘤细胞的生长。 利用正交实验设计确立了从莪术饮片中同时提取多糖及挥发油的最佳工艺。结果表明:粉碎程度为200目、水浸提4h、1∶20的浸提比的条件下,可以同时获得莪术多糖和挥发油的最大提取量,分别为24.8%和2.21%。


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