口腔鳞状细胞癌肿瘤干细胞的分选和鉴定

【摘要】：本实验通过口腔鳞状细胞癌的原代培养建立OSCCs原代培养模型,引进SCC-9舌鳞状细胞癌细胞系进行CD44特异性免疫荧光抗体标记流式细胞术分选出CD44~+的肿瘤细胞,并鉴定CD44~+的肿瘤细胞为肿瘤干细胞样细胞。结果如下:①严格遵守无菌操作,成功建立了OSCCs原代培养的模型;②原代培养模型中分选出CAFs,CAFs对肿瘤生长微环境(Cell niche)的调节起到重要作用;③在SCC-9舌鳞癌细胞系中CD44可以作为分选肿瘤干细胞的特异性表面标志物;④SCC-9中CD44~+的肿瘤干细胞样细胞所占的比例约为30%;⑤CD133在CD44~+的肿瘤细胞中表达相对较高,可能成为分选口腔鳞状细胞癌的另一个特异性表面标志物;⑥干细胞基因Oct-4和原癌基因BMI-1在CD44~+的OSCCs表达明显升高,可能在维持口腔鳞状细胞癌肿瘤干细胞性发挥了重要作用;⑦Ezrin在CD44~+的OSCCs表达明显升高,与CD44密切相关,Ezrin作为连接CD44与细胞骨架结构的桥梁,在口腔鳞状细胞癌肿瘤干细胞的转移和浸润中发挥了重要的作用;⑧CD44/Ezrin复合体与口腔鳞状癌肿瘤干细胞的生物学特性密切相关,可能成为口腔鳞癌彻底根治的靶点;⑨CD44/Ezrin复合体在肿瘤干细胞中发挥重要生物学作用时发生了哪些变化或修饰及与之相关的细胞信号传导通路将成为我们下一步研究的重点。 综上所述,检测了胚胎干细胞特异性蛋白和基因在OSCC分选出的细胞中表达的差异,通过分选细胞的体内外实验的结果比较充分说明了CD44~+OSCCs具有肿瘤干细胞的特征,在SCC-9舌鳞癌细胞系中通过CD44特异性标记流式细胞术分选出的肿瘤细胞是我们所要获得的目的细胞—口腔鳞状细胞癌肿瘤干细胞。摸索出了口腔鳞状细胞癌原代培养的方法,为进一步的研究提供前期工作基础。