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单链DNA结合蛋白与单链DNA相互作用的AFM研究

李金京  
【摘要】:核酸与蛋白质是构成生命的重要物质,二者的相互作用在诸如生长、繁殖、遗传和代谢等生命现象中发挥着重要的作用。从单分子水平上对它们的相互作用进行纳米探测,有利于人们更加深入地理解与调控这些重要的生理过程,是人们解开生命奥秘的关键所在。原子力显微镜(AFM)成像可以直观地给出分子间相互作用的模式,而基于原子力显微镜的单分子力谱技术可以定量给出分子间相互作用的强度。本论文中首先用滚环复制的方法制备了一种具有重复序列的长的单链DNA,并且使之与单个重复序列的互补链段进行互补,对这两种DNA定量地进行了单分子力谱研究。然后使单链DNA与枯草芽孢杆菌的单链DNA结合蛋白(SSB protein)结合,通过原子力显微镜的扫描成像功能对其结合模式进行了表征,并结合了单分子力谱的方法,尝试了用这种长的单链DNA片段作为基底,直接与天然SSB作用,通过对比纯的单链DNA以及天然SSB蛋白存在下单链DNA力学性质的差异,定量获得SSB蛋白与单链DNA的结合强度信息。


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