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激活素A抑制人晶状体上皮细胞增殖的实验研究

李凤至  
【摘要】:目的: 探讨激活素A(activinA, ACTA)对人晶状体上皮细胞株SRA01/04(human lens epithelial cell,HLEC SRA01/04)增殖的抑制作用及作用机制的研究,及其与时间—效应的关系。 方法: (1)细胞培养:HLECs用10%FBS的LDMEM培养液培养,并收集状态良好的对数生长期细胞进行下列实验; (2)四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)比色法:检测10ng/mlACTA作用于HLECs 24h、48h、72h后细胞生长抑制率; (3)流式细胞术(flow cytometrc analysis, FCM):检测10ng/ml的ACTA作用于HLECs 24h、48h、72h后早期细胞凋亡率; (4) DAPI免疫荧光染色(4,6—diamidino—2—phenylindole dihydro-chloride, DAPI):观察lOng/ml的ACTA作用于HLECs 48h后的形态学改变; (5)免疫荧光:观察lOng/ml的ACTA作用于HLECs 24h、48h、72h后,检测caspase-3蛋白的表达量。实验结果均行统计学分析。 结果: (1)MTT:10ng/mlACTA溶液作用于HLECs 24h、48h、72h后其抑制率分别为:10.02%、10.91%、18.11%,说明ACTA对HLECs有明显的抑制作用,并随作用时间增加而增加,差异有统计学意义(P均0.05)。 (2)FCM:ACTA作用于HLECs 24h、48h、72h后,早期细胞凋亡率分别为2.3%、6.2%、9.4%,而空白对照组的早期细胞凋亡率为1.4%,说明ACTA对HLECs有诱导凋亡的作用,各组间差异有统计学意义(p0.05),并呈时间一效应关系。 (3)DAPI:ACTA作用于HLECs 48h后细胞变小变圆、细胞膜发生皱缩、染色质浓缩、染色质断裂、聚集、核碎裂等凋亡的形态学改变。对照组细胞形态规则,细胞核饱满,荧光染色均一。 (4)免疫荧光:ACTA作用于HLECs 24h、48h、72h后,caspase-3蛋白表达随时间增加而增加。差异有统计学意义(p0.05)。 结论: 激活素A对人晶状体上皮细胞的增殖有抑制作用及诱导凋亡的作用,并呈时间—效应关系,因此可望成为防治后发性白内障的有效药物。


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