收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

Hg2+快速免疫检测技术研究

张燚  
【摘要】:汞及其它重金属传统的检测方法如原子吸收光度法、电感耦合等离子体质谱法等可满足痕量检测需要,但这些方法设备昂贵、检测费时费力且成本高,不适应现场快速检测的需要。免疫检测方法具有快速、灵敏、适于现场检测等特点,为汞及其它重金属的检测提供了一种新的选择。本研究旨在制备高亲和力、高特异性抗重金属汞的单克隆抗体,并以单克隆抗体为基础建立检测汞离子的快速免疫分析方法。 选用螯合剂EDTA的衍生物aminobenzyl-EDTA、ITCBE将汞离子螯合,再和载体蛋白偶联,制备汞的免疫抗原、检测抗原及对照检测抗原,采用SDS-PAGE电泳、紫外扫描、原子吸收法及动物免疫方法对所制备的抗原偶联物进行鉴定。用经鉴定免疫原性较好的免疫抗原KLH-aminobenzyl-EDTA-Hg免疫BALB/c小鼠,六免后进行细胞融合、杂交瘤细胞筛选、克隆试验,只保留对BSA-aminobenzyl-EDTA-Hg强阳性、BSA-aminobenzyl-EDTA阴性的细胞株,并进行抗体亚类鉴定。选用分泌抗体亚类为IgG的细胞株进行腹水制备、纯化、鉴定。利用纯化的抗汞单克隆抗体建立用于检测汞离子的间接竞争ELISA方法及胶体金免疫层析法。 用aminobenzyl-EDTA、ITCBE成功制备出完全免疫抗原(KLH-aminobenzyl-EDTA-Hg、KLH-ITCBE-Hg)、检测抗原(BSA-aminobenzyl-EDTA-Hg、BSA-ITCBE-Hg)、对照检测抗原(BSA-aminobenzyl-EDTA、BSA-ITCBE),免疫抗原KLH-aminobenzyl-EDTA-Hg比KLH-ITCBE-Hg更易刺激小鼠产生特异性抗体。用免疫原性较好的KLH-aminobenzyl-EDTA-Hg免疫BALB/c小鼠,经过细胞融合、筛选试验,成功制备出2株抗汞单克隆抗体,其中3D9亚类为IgM,5F7为IgG1;用细胞株5F7进行腹水大量生产获得的腹水效价为1.28×106,亲和常数Ka为4.31×109L/mol,与Cd2-、Pb2+的交叉反应率分别为0.94%、0.381%.与其它金属离子的交叉反应率小于0.2%,属于高效价、高亲和性、高特异性抗体。 利用抗汞单克隆抗体(5F7)建立了检测汞离子的间接竞争ELISA方法,该法与Cd2+Pb2+的交叉反应率分虽为0.97%、0.493%,与其它金属离子的交叉反应率0.2%,最低检测限为0.042μg/L,检测范围为0.087-790.4μg/L,批内平均变异系数(CV)为4.36%,批间变异系数为6.29%;汞离子标准溶液添加回收率为96.47-104.6%;用于实际环境水样检测与石墨炉原子吸收法相比,符合率为88.82-104.64%。用单克隆抗体(5F7)成功制备出用于检测汞离子的免疫胶体金试纸条,该试纸条与水样中常见的离子标准溶液(Cu2+,Zn2+, Cd2+,Cr3+, Pb2-, Co2-, Ni2-,Mg2-,Ag-, Ca2-, Mr2-, Mg2-, Fe3-,浓度范围0.0001-100μg/mL)不发生交义反应,表明试纸条特异性强;当汞离子浓度为0.1、0.5μg/L时,试纸条呈阴性,当汞离子浓度>0.8μg/L时试纸条呈阳性,表明所制备的试纸条检测限为0.8μg/L;4℃保存3个月后,所有试纸条检测限均为0.8μg/L,表明试纸条稳定性及重复性较好。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 徐英,谢三星;肉及其制品免疫检测技术进展[J];肉品卫生;1997年05期
2 刘功良;陶嫦立;白卫东;赵文红;;有机磷农药的免疫检测研究进展[J];食品与发酵工业;2010年01期
3 韩婷;陈红兵;;免疫分析技术在食品农残药残检测方面的应用[J];江西食品工业;2008年03期
4 顾炜炜;潘家荣;;Bt蛋白免疫检测技术研究进展[J];食品工业科技;2007年01期
5 李春生;;免疫检测技术在农畜产品安全检测中的应用[J];河北省科学院学报;2009年01期
6 郑晓冬,何丹;食品中农药残留免疫检测技术的研究进展[J];中国食品学报;2004年02期
7 柳其芳;酶联免疫检测技术在食品卫生理化检验中的应用[J];中国食品工业;2004年01期
8 潘云娣,杨文鸽;现代生物技术在食品检测中的应用[J];生物技术通报;2004年06期
9 马成;樊景凤;关道明;曹善茂;;硝化细菌检测技术的研究进展[J];海洋环境科学;2008年03期
10 丛蕾;王锡昌;刘源;卢瑛;;河豚毒素免疫检测技术研究进展[J];食品科学;2009年19期
11 余若祯;王红梅;方征;闫振广;王宏;;重金属离子快速检测技术研究与应用进展[J];环境工程技术学报;2011年05期
12 林影;叶茂;韩双艳;吴晓英;;免疫检测技术的研究进展[J];食品与生物技术学报;2007年04期
13 张海棠;王自良;刘耀东;;食品镉离子污染免疫检测技术的研究与应用[J];生物技术通报;2009年04期
14 杨明;陈伯祥;郭慧琳;赵强;聂嘉琦;;免疫学检测技术在食品安全中的应用[J];甘肃林业高职教育(综合版);2009年02期
15 郭皓;免疫方法在藻毒素及贝毒素检测中的应用[J];卫生研究;1999年02期
16 余若祯,何苗,施汉昌,钱易;小分子环境污染物的免疫检测技术及其研究进展[J];环境工程;2005年03期
17 李兴霞;程玉来;王国霞;潘家荣;;免疫检测新技术在食品检测中的应用[J];食品工业科技;2006年03期
18 本刊通讯员;;科技部投入5057万元支持吉林两个中药和生物制药项目[J];中国中医药信息杂志;2009年02期
19 麻丽华;;微囊藻毒素的检测技术与污染控制技术的研究进展[J];常州轻工职业技术学院学报;2007年03期
20 于基成;郭乃菲;;酶免疫检测技术及其在农产品质量安全控制中的应用[J];食品工业科技;2008年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈舒迟;;免疫检测技术在食品安全中的应用[A];2010第二届中国食品安全高峰论坛论文集[C];2010年
2 李丽琴;陈乐贵;林福生;张瑞华;;蛋白毒素免疫检测技术研究[A];第八届全国生化药理学术讨论会暨第七届Servier奖颁奖大会会议摘要集[C];2003年
3 尹惠琼;杨姝;贾茗娴;章金刚;;蓝舌病病毒新型纳米探针免疫检测技术[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
4 张永乐;厉小玉;潘克女;钟华燕;刘寿荣;;甲型H1N1流感病毒快速诊断核酸试纸条的研制及应用[A];第四届中国医师协会感染科医师大会暨传染病诊治高峰论坛、浙江省医学会肝病、感染病学学术年会论文汇编[C];2011年
5 尹惠琼;贾茗娴;杨姝;王升启;章金刚;;蓖麻毒素新型纳米探针免疫检测技术[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
6 庄金秋;梅建国;沈志强;;胶体金免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
7 郭华;梅琳;韩雪清;林祥梅;;口蹄疫胶体金免疫层析试纸条检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
8 祁光宇;智晓莹;任维维;黄银军;牟克斌;刘学荣;王宇;蒋韬;;两种方法制备胶体金及其免疫标记的比较研究[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会(第三届中国兽药大会学术论坛)论文集[C];2010年
9 张成福;张子玉;;PAN试纸条的制取及精斑检测[A];首届中国法医物证学术交流会论文汇编[C];1993年
10 张洋;蔡春尔;饶涛;贾睿;何培民;;免疫胶体金试纸条在海产品中快速检测腹泻型贝毒的应用[A];中国藻类学会第八次会员代表大会暨第十六次学术讨论会论文摘要集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张燚;Hg2+快速免疫检测技术研究[D];吉林大学;2011年
2 贺江;丙溴磷、马拉硫磷、啶虫脒残留检测新技术研究[D];西北农林科技大学;2011年
3 陈惠滨;小型SPR分析系统设计及其在环境污染检测中的应用研究[D];浙江大学;2011年
4 孔涛;重金属铜、镉快速免疫检测技术研究[D];吉林大学;2010年
5 陈克研;猪血凝性脑脊髓炎免疫层析检测试纸及其灭活疫苗的研制[D];吉林大学;2011年
6 蒲丹;SARS病毒重组核衣壳蛋白胶体金试纸条研制和临床验证[D];重庆医科大学;2004年
7 张志刚;奶牛亚临床酮病诊断试纸条研制及其初步应用[D];吉林大学;2009年
8 任立松;苏丹红I与柠檬黄单链融合抗体的制备及快速免疫学检测方法研究[D];吉林大学;2008年
9 谢光洪;黄曲霉毒素B1免疫层析试纸条快速检测方法的研制[D];吉林大学;2008年
10 浦昀;三种鼠传疾病快速检测胶体金试纸条的研制[D];吉林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孔令文;氯霉素侧流层析免疫检测技术研究[D];浙江海洋学院;2012年
2 刘景坤;农产品中氰戊菊酯农药残留免疫检测技术研究[D];中国农业科学院;2012年
3 高玲美;新城疫快速诊断金标试纸条的研制及初步应用[D];山东农业大学;2004年
4 徐霞玲;两种重要兽药残留物胶体金试纸条的研制及工艺的优化[D];暨南大学;2011年
5 薛拥志;鸡新城疫病毒免疫金标试纸条的研制及其应用[D];河北农业大学;2003年
6 邹新海;磺胺甲噁唑单抗制备及胶体金免疫层析试纸条的研制[D];扬州大学;2010年
7 戴荣四;鸡新城疫免疫胶体金诊断技术的研究[D];湖南农业大学;2004年
8 宋文学;相思子毒素免疫层析胶体金试纸条的研制[D];吉林大学;2008年
9 许欣;湖羊早期妊娠诊断免疫胶体金层析试纸条的初步研制[D];南京农业大学;2010年
10 颜春荣;农药残留免疫检测技术及其应用研究[D];南京农业大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张明;血糖试纸须4个月内用完[N];医药养生保健报;2007年
2 中南大学湘雅二医院老年内分泌病区 张孟喜;自测血糖的常见问题[N];健康报;2008年
3 ;自行测血糖四注意[N];医药导报;2006年
4 黄冈市中心医院检验科 詹志平;尿液分析仪使用及镜检之我见[N];黄冈日报;2009年
5 见习记者 刘喜梅;检测,有助于食品企业良性发展[N];人民政协报;2011年
6 本报特约专家 范丽凤;使用血糖仪十注意[N];健康时报;2005年
7 王锦蓉;怎样正确使用快速血糖检测仪[N];家庭医生报;2007年
8 万振宽;模拟血糖液:三个月内有效[N];健康时报;2009年
9 记者 张晓姝;王瑛获2010年省新技术一等奖[N];黑龙江经济报;2011年
10 特约指导专家 河北省人民医院内分泌科主任 刘俊江;家用血糖仪应定期检测[N];医药导报;2007年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978