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狂犬病病毒、细小病毒病毒样粒子及嵌合细小病毒样粒子的构建、鉴定与实验免疫研究

冯昊  
【摘要】:狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus, RABV)引起的一种重要人畜共患病,全球每年约有55000人死于该病感染,而携带狂犬病病毒动物的咬伤是感染该病主要原因,因此控制人类狂犬病最有效的方法是消除动物狂犬病。犬细小病毒CPV(Canine parvovirus, CPV)和犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)两类病毒具有高度接触传染性,且发病率高,经常引起大批经济动物发病,对经济动物养殖业危害很大,造成重要经济损失。目前用于预防这几种病毒病的疫苗主要是弱毒疫苗和灭活苗,但是存在相应的弱点。因而,探讨针对狂犬病病毒、犬细小病毒和犬瘟热病毒的新型疫苗具有重要意义。 本研究对狂犬病病毒、犬细小病毒和犬瘟热病毒的病毒样粒子疫苗进行探索,主要内容如下: 1、狂犬病病毒样粒子的构建、鉴定和和实验免疫研究 目前报道已有多种病毒的病毒样粒子构建成功,但是狂犬病病毒样粒子还未有任何研究报道,因此,本实验利用Bac to Bac系统构建表达狂犬病病毒G蛋白和M蛋白的重组杆状病毒,并将两种重组病毒混合后注射至家蚕和蚕蛹体内。检测结果表明相应蛋白得到表达且包装形成狂犬病病毒样粒子。病毒样粒子免疫小鼠,经ELISA检测表明小鼠体内产生针对狂犬病病毒抗体。实验表明狂犬病病毒样粒子包装形成且具有免疫原性,能刺激动物机体产生抗体。 2、犬细小病毒样粒子的构建、鉴定和实验免疫研究 杆状病毒表达系统拥有众多优点,应用于生产重组蛋白、病毒样粒子和人用及兽用疫苗。因此本实验利用Bac to Bac系统和线性亲本病毒DNA重组系统分别构建表达犬细小病毒VP2蛋白的重组杆状病毒,将重组病毒注射家蚕和蚕蛹。鉴定结果表明目的蛋白在家蚕和蚕蛹中成功表达,且包装形成细小病毒样粒子。病毒样粒子免疫小鼠,经ELISA、血凝抑制实验检查表明小鼠体内产生针对细小病毒的抗体。此外,VP2蛋白的表达量在线性亲本病毒DNA重组系统中要高于Bac to Bac系统。 3、嵌合细小病毒样粒子的构建、鉴定和实验免疫研究 病毒样粒子除了可直接作为免疫原外,还可作为载体携带、转运抗原表位、DNA和其它小分子。在本实验中利用Bac to Bac系统构建两类嵌合细小病毒样粒子:细小病毒/犬瘟热病毒嵌合病毒样粒子;细小病毒/狂犬病病毒嵌合病毒样粒子。结果表明相应蛋白在家蚕和蚕蛹中得到表达,并包装形成嵌合细小病毒样粒子。病毒样粒子免疫小鼠后,经ELISA、血凝抑制实验表明小鼠体内产生针对细小病毒VP2蛋白的抗体。结果表明嵌合病毒样粒子能够包装形成,并具有免疫原性。 实验结果表明,利用杆状病毒作为载体在家蚕和蚕蛹体内所生产的病毒样粒子作为疫苗,能够产生较好的免疫结果,具有良好的应用前景。


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