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肝螺杆菌感染不同品系小鼠模型的建立以及慢性乙肝患者血清肝螺杆菌抗体阳性率分析

李红艳  
【摘要】:第1章肝螺杆菌感染不同品系实验室小鼠模型的建立及其特征分析 目的:应用H.hepaticus标准菌株ATCC51450感染不同品系实验室小鼠,观察H.hepaticus在不同消化道组织的定植状况及其病理特征,建立稳定的H.hepaticus感染实验室小鼠模型。 方法:选取已经证实无H.hepaticus感染的SPF级雄性BALB/cCr、SCID/Cr、 C57BL/6Cr小鼠各30只口服灌饲H.hepaticus标准菌株ATCC51450菌液0.2毫升(1×108CUF/ml),连续3次,每次间隔48小时,对照组灌饲等量的PBS。于末次接种H.hepaticus后第1、3、6、9、12个月时,禁食12h后处死小鼠,每组5只。眼球取血后应用ELISA法检测血清H.hepaticus-IgG抗体水平;分别取小鼠食管、胃、空肠、回肠、盲肠、结肠、肝脏及胰腺组织,行病理组织学检查、微需氧菌分离培养鉴定及H.hepaticus特异性16SrRNA基因扩增。 结果:BALB/cCr小鼠血清H.hepaticus-IgG抗体检出率最高,从感染后1个月至感染后12个月,在每间隔3个月的分析中,检出率均为100%;C57BL/6Cr小鼠血清H.hepaticus-IgG抗体检出率在40~60%之间;在SCID/Cr小鼠血清中无论是感染后的1个月,还是至12个月均未检测出H.hepaticus-IgG抗体。无论是BALB/cCr小鼠还是C57BL/6Cr小鼠,H.hepaticus-IgG抗体水平均在感染后6个月达最高峰,以后逐渐下降。BALB/cCr小鼠和SCID/Cr小鼠H.hepaticus感染后1个月时盲肠定植率为80%,此后持续在盲肠定植,从3至12个月盲肠定植率均为100%,此外在结肠、回肠以及空肠亦有不同程度的定植,定植率不超过60%;BALB/cCr小鼠和SCID/Cr小鼠自H.hepaticus感染后3个月起可在肝组织中发现H.hepaticus定植,BALB/cCr小鼠和SCID/Cr小鼠肝脏定植率均在20~40%之间。而C57BL/6Cr小鼠H.hepaticus感染后1至12个月盲肠、结肠、回肠、空肠亦有不同程度的定植,但定植率低于BALB/cCr小鼠和SCID/Cr小鼠;C57BL/6Cr小鼠仅在H.hepaticus感染后6个月时有1只小鼠肝组织中发现H.hepaticus定植,定植率为20%。H.hepaticus感染各品系小鼠胃、食管及胰腺组织和各PBS对照组小鼠的不同消化道组织中均未发现H.hepaticus的定植。各品系小鼠H.hepaticus感染后不同消化道组织H.hepaticus特异性16SrRNA基因阳性率高于定植率;H.hepaticus感染的BALB/cCr和SCID/Cr小鼠肝脏、盲肠及结肠病理组织学评分明显高于C57BL/6Cr小鼠(P<0.01),BALB/cCr和SCID/Cr小鼠H.hepaticus感染后6个月内随着感染时间的延长肝脏病理组织学评分逐渐增加(P<0.05;P<0.01),6个月至12个月肝脏病理组织学评分有加重的趋势,但无明显差异;而BALB/cCr和SCID/Cr小鼠H.hepaticus感染后3个月盲肠及结肠病理组织学评分明显高于1个月时的组织学评分(P<0.05;P<0.01),3至12个月盲肠及结肠病理组织学评分无明显差异。 结论:H.hepaticus感染在小鼠消化道的定植部位为下消化道及肝脏,盲肠是其起始的定植部位;BALB/cCr和SCID/Cr小鼠H.hepaticus感染后肝脏、盲肠及结肠病理组织学改变较C57BL/6Cr小鼠更为明显,病理组织学改变随着感染时间的延长而逐渐加重;不同品系小鼠对H.hepaticus的易感性不同,BALB/cCr、SCID/Cr小鼠接种H.hepaticus后可获得较好的H.hepaticus感染小鼠模型。 第2章慢性乙型病毒性肝炎患者血清肝螺杆菌抗体阳性率分析 目的:通过对慢性乙型病毒性肝炎患者血清H.hepaticus-IgG抗体阳性率进行调查,探讨H.hepaticus感染在慢性乙型病毒性肝炎发生发展中可能的致病作用。 方法:采用病例对照研究方法对356例慢性乙型病毒性肝炎患者H.pylori抗原完全吸收前后血清H.hepaticus-IgG抗体进行检测,分析血清H.hepaticu-IgG抗体阳性率与年龄、性别、HBV载量及病程等因素之间的关系。对照组为同期性别和年龄相匹配的312例健康体检者。 结果:吸收试验前慢性乙型病毒性肝炎患者血清H.hepaticus-IgG抗体阳性率明显高于健康体检者(P<0.05);H.pylori抗原吸收试验后慢性乙型病毒性肝炎患者及健康体检者血清H.hepaticus-IgG抗体阳性率较吸收试验前明显下降,但慢性乙型病毒性肝炎患者血清H.hepaticus-IgG抗体阳性率仍高于健康体检者(P<0.05)。慢性乙型病毒性肝炎患者及健康体检者在不同性别及不同年龄组之间血清H.hepaticus-IgG抗体阳性率无明显差异(P>0.05);慢性乙型病毒性肝炎患者在不同HBV载量组之间血清H.hepaticus-IgG抗体阳性率无明显差异(P>0.05)。随着乙型肝炎肝硬化患者Child-Pugh分级的增高其血清H.hepaticus-IgG抗体阳性率增加(P0.05)。 结论:慢性乙型病毒性肝炎患者血清H.hepaticus-IgG抗体阳性率增高,且随着乙型肝炎肝硬化患者Child-Pugh分级的增高其血清H.hepaticus-IgG抗体阳性率增加;慢性乙型病毒性肝炎患者血清H.hepaticus-IgG抗体阳性率与年龄、性别及不同HBV载量之间无明显关系;H.hepaticus感染可能与慢性乙型肝炎的发生发展相关。 第3章细胞致死性膨胀毒素在肝螺杆菌感染不同品系实验室小鼠慢性肝损伤中致病作用探讨 目的:应用H.hepaticus标准菌株ATCC51450感染不同品系实验室小鼠,观察细胞致死性膨胀毒素在H.hepaticus诱导的肝脏病理损伤中的致病作用。 方法:选取已经证实无H.hepaticus感染的SPF级雄性BALB/cCr、SCID/Cr及C57BL/6Cr小鼠各30只,口服灌饲H.hepaticus标准菌株ATCC51450菌液0.2毫升(1×108CUF/ml),连续3次,每次间隔48小时。于最后一次接种H.hepaticus后1、3、6、9、12个月时,禁食12h后处死小鼠,每组5只。随机留取各组小鼠的肝脏组织分为2份,分别行H.hepaticuscdtB基因扩增并测序及病理组织学检查。 结果:BALB/cCr和SCID/Cr小鼠H.hepaticus感染后3个月时肝组织中扩增出cdtB基因,BALB/cCr小鼠肝组织cdtB基因阳性率为11/25(44%);SCID/Cr小鼠肝组织cdtB基因阳性率为12/25(48%);C57BL/6Cr小鼠H.hepaticus感染后肝组织cdtB基因阳性率仅为3/25(12%)。cdtB基因目的片段约为193bp,PCR产物测序结果与genebank上H.hepaticusATCC51449cdtB基因序列比较同源性为99%;BALB/cCr、SCID/Cr小鼠H.hepaticus感染后cdtB基因阳性者的肝脏病理组织评分明显高于cdtB基因阴性者(P<0.01)。 结论:H.hepaticus感染不同品系小鼠肝组织中不同程度地扩增出H.hepaticus cdtB基因, CDT作为H.hepaticus分泌的一种毒素,可能在H.hepaticus诱导的慢性肝损伤中发挥一定的致病作用。


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