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外源表达人激活要素受体ⅡA对人晶状体上皮细胞增殖的影响

赵瑞苓  
【摘要】:目的: 探讨外源表达激活素受体ⅡA(Activin Receptor ⅡA,ActRⅡA)对人晶状体上皮细胞(Human Lens Epithelial Cell, HLEC)增殖的影响。 方法: (1)将ActRⅡA质粒酶切鉴定后连接到真核表达载体PC-DNA3.0上,共表达一段融合蛋白c-myc,构建重组质粒PC-DNA3.0c-myc-ActRⅡA;LDMEM培养基培养HLECs,以脂质体介导将重组质粒PC-DNA3.0c-myc-ActRⅡA和空载体质粒PC-DNA3.0分别转入该细胞,转染48h后,采用浓度为800ug/ml的G418进行筛选,建立稳定表达ActRⅡA的实验组和对照组细胞系;采用免疫印迹方法检测目的蛋白ActR ⅡA在HLECs的表达情况; (2)采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)方法分别检测实验组和对照组HLEC的增殖情况,分别在培养24h,48h,72h…10d后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS配)20μl,37℃,5%CO2孵育4h后,用酶标仪在570nm波长处检测吸光度OD。 结果: 通过免疫印迹法检测到实验组较对照组ActRⅡA表达明显增多,通过MTT法检测HLEC增殖发现,实验组与对照组比较,两组差异显著性明显(P<0.01),实验组细胞增殖受到明显的抑制,并随时间延长抑制作用逐渐增加。 结论: 外源基因ActRⅡA成功转染HLEC,构建了稳定表达ActRⅡA的HLEC细胞系;外源转入的激活素受体ⅡA(ActRⅡA)在HLECs内有较高表达;外源表达ActRⅡA对HLEC增殖有抑制作用,且随时间延长抑制逐渐明显,从而为基因治疗后发性白内障奠定了一定的理论基础。


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