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铜绿假单胞菌的金属β-内酰胺酶基因型研究

陈媛媛  
【摘要】:铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是一种常见的条件致病菌,属于非发酵革兰阴性杆菌。在水、空气、土壤等自然界环境中分布广泛,可引起皮肤软组织、呼吸系统、泌尿系统等多种部位的感染。由于它在医院环境中广泛存在,因此它也是医院感染中较为重要的病原菌之一[1]。近年来中国CHINET细菌耐药性监测结果显示铜绿假单胞菌的临床分离率一直居于非发酵菌的首位,2005年占革兰阴性杆菌的11.6%,2007年上升至16.9%,2010年占14.8%,近三年的CHINET细菌耐药性监测结果显示铜绿假单胞菌的分离率有所下降,但是仍然是目前临床分离的最常见的细菌之一。近年我院细菌耐药性监测结果显示铜绿假单胞菌也居于临床分离的非发酵菌的首位,且分离率呈现逐年上升的趋势。 碳青霉烯类抗生素一直是临床上控制革兰阴性杆菌感染最有效的抗生素,但是随着碳青霉烯类抗生素的广泛应用,细菌也逐渐获得对此类药物的耐药性,尤其是铜绿假单胞菌及鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药最为严重,而且还呈现不断上升趋势。2010年CHINET细菌耐药性监测结果显示铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率达到30.8%[2]。 铜绿假单胞菌对碳青霉稀类抗生素耐药的机制主要是产生碳青霉烯酶;膜孔道蛋白缺失;药物主动外排泵的过度表达;青霉素结合蛋白(PBPs)的改变等,其中产生碳青霉烯酶是其最主要的耐药机制,而金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌产生的最主要的碳青霉烯酶。 为了解我院铜绿假单胞菌的感染现状及耐药趋势,收集我院2010年1月至2011年12月间临床分离的536株铜绿假单胞菌,应用美国DADE公司的MicroScan Walkaway96系统将细菌鉴定到种,应用NC31板结合纸片扩散法进行抗生素敏感性试验,应用WHONET5.5软件进行结果分析。 同时为了解我院铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制,收集71株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌(IRPA),应用双纸片协同试验(DDST)筛选出产金属β-内酰胺酶的菌株,应用聚合酶链式反应(PCR)对目的片段进行扩增,产物经DNA测序分析后,判断其金属β-内酰胺酶基因型。 研究结果显示,我院临床分离的铜绿假单胞菌对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,其次为阿米卡星、左旋氧氟沙星、头孢他啶,哌拉西林/他唑巴坦、亚胺培南。亚胺培南的耐药率超过20%,低于全国平均水平。71株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌(IRPA)中,DDST试验阳性菌株28株,经PCR扩增,测序得10株产IMP-1型金属β-内酰胺酶,产金属β-内酰胺酶的菌株占耐亚胺培南铜绿假单胞菌的14.08%,其余菌株未在设计的引物下扩增出片段,可能为其他类型的金属β-内酰胺酶。可知我院的金属β-内酰胺酶的基因型主要以IMP-1型为主,应该引起广泛的关注,防止其爆发流行。本次试验没有发现金属β-内酰胺酶的新基因型。


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