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二甲基乙酰胺、海藻糖与低密度脂蛋白对猪精液冷冻保存效果的研究

张伟  
【摘要】:与常温保存的精液相比,利用冷冻保存猪精液对母猪进行人工授精,其受胎率和产仔率都较低,导致使用冻精进行人工授精还不能用于养猪生产。由于猪一次射精量大但精子密度低、精子质膜的多不饱和脂肪酸类(PUFAs)含量高和对冷冻保存过程中的温度变化特别敏感等特点,因此精子易受冷冻-解冻损伤。然而,其损伤可以通过添加抗冻保护剂来调节。甘油(3%浓度)是猪精液冷冻保存最常用的抗冻保护剂(CAs)。但有研究表明甘油对精子细胞的代谢和质膜具有化学和渗透毒性作用,引起精子质膜破裂,此外,它还具有避孕作用。因此,促进了其它CAs的研究。 为了改善猪精液冷冻保存效果,提高解冻后猪精液品质,本试验通过在猪精液冷冻保存稀释液内添加海藻糖、二甲基乙酰胺(DMA)、低密度脂蛋白(LDL),以解冻后精子活率、精子成活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体活性以及对脂质过氧化反应程度为评价指标,研究它们对猪精液冷冻保存后精子品质的影响,取得如下结果: 1.采用5%DMA(v/v)完全替代3%甘油,比较乳糖与DMA、乳糖与甘油、海藻糖与DMA、海藻糖与甘油四种组合对精液冷冻保存效果的影响。结果表明,海藻糖与DMA组合显著提高了解冻后精子成活力(49.17±1.78%)与顶体完整性(47.22±0.74%)(P0.05)。 2.利用海藻糖替代乳糖,评价不同浓度的DMA对精液冷冻保存的影响。结果表明,当DMA添加量为4%时,解冻后精子活率、成活力、顶体完整率分别为(45.17±0.56%)、(50.33±0.67%)、(48.30±1.44%),均显著高于3%,6%DMA添加组(P0.05),精子活率显著高于5%DMA添加组(P0.05),但精子成活力、顶体完整率均与其差异不显著(P0.05)。因此,当利用海藻糖作为冷冻保存基础稀释液时,DMA最适添加量为4%。 3.对精液进行冷冻保存时,当细管置于距离液氮4cm处冷冻时,解冻后活动精子百分率(TMS%)(58.17±0.87%)、直线活性精子百分率(RPM%)(38.75±1.84%)均显著高于其它三组(P0.05)。4cm组解冻后精子曲线运动速度(VCL)(77.18±1.97μm/s)、直线运动速递(VSL)(51.96±1.63μm/s)、平均路径速度(VAP)(49.34±2.37μm/s)与3cm组处均无显著差异(P0.05),但均高于另外两组(P0.05)。4cm组解冻后精子的成活力(54.8±1.42%)、质膜完整性(48.30±1.36%)均显著高于其它三组(P0.05)。4cm组解冻后精子顶体完整性(50.37±1.15%)、线粒体活性(49.31±1.57%)均与3cm组无显著差异(P0.05)但均显著高于5cm、6cm组(P0.05)。此外,4cm组解冻后精子的丙二醛产量(1.35±0.26nmol/10~8精子)最低。综上所述:当细管距离液氮4cm处进行冷冻保存将产生最佳的冷冻保存效果。 4.在冷冻稀释液内利用LDL取代鸡卵黄用于猪精液冷冻保存。在猪精液冷冻稀释液内添加7%,8%,9%和10%浓度的LDL并检测它对解冻后精子质量的影响。结果显示:与其它试验组相比,添加8%LDL显著提高解冻后精子活率(54.38±1.48%)(p0.05);添加8%,9%LDL组解冻后精子成活力与质膜完整率差异均不显著(P0.05),分别为(52.26±1.57%)、(50.68±0.87%)与(54.46±1.78%)、(53.62±1.26%),但均显著高于其它组(p0.05);与对照组(20%鸡卵黄组)相比,添加不同浓度的LDL均显著提高顶体完整率(p0.05),其中添加8%浓度的LDL具有最高的顶体完整率,精子顶体完整率可达(58.60±1.54%)。综合评定结果:8%浓度LDL为最佳添加浓度,更能提高猪精液冷冻保存效果。


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