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小鼠脾脏朊病毒复制重要相关因子的筛选与鉴定

汤鑫  
【摘要】:朊病毒病是由朊病毒PrP~(Sc)(异常的朊蛋白)引起的一种传染性、致死性的神经退行性疾病又叫做动物传染性海绵状脑病(TSE),包括人类的克雅氏病、疯牛病、羊瘙病等。 疯牛病等TSE主要由于人类在饲养动物过程中违背伦理,饲喂肉骨粉给动物,同类相食从而导致疯牛病等TSE传播、暴发。 尽管朊病毒感染过程中宿主没有典型的免疫应答,但是人们知道脾脏、淋巴结等淋巴组织在朊病毒复制、传播等朊病毒病过程中发挥着重要作用。脾脏是动物体内最大的免疫器官,并且有研究表明感染朊病毒的动物模型中最快2周即可在脾脏中检测到PrP~(Sc)的存在,而这一时间在脑中并没有检测到。所以对感染朊病毒的动物模型脾脏进行研究是非常必要的。 为了研究脾脏在TSE感染中所处地位以及相关蛋白变化,本研究首先给BALB/c小鼠接种感染22L型TSE毒株的鼠脑匀浆,并设立对照组,对照组接种物为正常小鼠脑匀浆。饲养过程中定期观察活动状况并对小鼠体重进行测量,待濒死期对一部分小鼠脾脏进行切片制作,观察脾脏病理变化,另一部分小鼠进行脾脏全蛋白的提取,而后进行2D电泳,并用PDQUEST分析软件找出差异表达蛋白,经过3次重复,共筛选出13个差异表达蛋白点,对差异表达蛋白点进行MALDI-TOF-MS鉴定,初步筛选出脾脏中朊病毒复制相关的蛋白因子。查阅资料筛选相关蛋白因子,并进行Western-blot鉴定,发现P4hb,Lcp1,Hspa5表达量均呈现下降状态,并且Hspa5的表达随着时间的不同而不同,并进行相关分析,这为以后的朊病毒病机理研究奠定了前期基础,这也为TSE的研究提供了新的思路。


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