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重组灵芝免疫调节蛋白对环磷酰胺致小鼠白细胞减少症模型治疗及其机制研究

周慧  
【摘要】:本文探讨了重组灵芝免疫调节蛋白(Recombinant Ganoderma LucidumImmunoregulatory Protein,rLZ-8)对环磷酰胺致小鼠白细胞减少症模型治疗及其机制。通过给予不同剂量的环磷酰胺,分别建立单阶段和多阶段环磷酰胺致小鼠白细胞减少症的模型。每日两次腹腔注射rLZ-8治疗白细胞减少症,动物血液分析仪对中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞数量进行分析,发现rLZ-8可以显著治疗由环磷酰胺引起的小鼠白细胞减少症,特别是可以增加体内中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞数量。应用WST-1方法检测rLZ-8对小鼠脾脏细胞的作用,结果显示rLZ-8能够增殖小鼠脾脏细胞的刺激,具有潜在的提高机体免疫系统能力和器官造血功能。利用流式细胞仪检测rLZ-8对淋巴细胞分类的作用,包括B细胞、 CD4~+CD8~+T细胞,结果显示,rLZ-8可以维持CD4~+T和CD8~+T细胞之间的平衡,这对改善环磷酰胺引起的免疫功能损害和免疫系统失衡将起到至关重要的作用。应用酶联免疫吸附法进行小鼠血清IL-3、IL-4细胞因子的测定,发现rLZ-8可以促进IL-3、IL-4在体内的分泌水平。提取小鼠脾脏细胞RNA,通过RNA标记和阵列杂交,获得基因芯片结果。结合统计学分析、聚类分析、GO分析和Pathway分析,得到rLZ-8在治疗白细胞减少症过程中起到关键作用的基因:Akt2、Txk、Plcb2、Nfkb1、Ppp2c、Map2k1。 本实验的创新之处在于:成功建立了两种小鼠白细胞减少症模型,首次证明了rLZ-8可以同时增加各类白细胞数量,具有治疗白细胞减少症的药效学功能。rLZ-8促进免疫细胞增殖作用显著,提升了环磷酰胺诱导的白细胞减少症小鼠的机体免疫能力,对改善环磷酰胺引起的免疫功能损害和免疫系统失衡起到至关重要的作用。在国际上第一次实现了真菌免疫调节蛋白走向临床用药研发的新途径。揭示了rLZ-8治疗白细胞减少症相关的信号转导通路及其分子,为rLZ-8开发为临床用药提供了理论依据。


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