收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

左卡尼汀抗心肌细胞凋亡机制的实验研究

毛毳颖  
【摘要】:随着人们对缺血性心脏病发病机制认识的不断深入,心肌能量代谢在其发生发展,特别是心功能恶化方面的的作用得到了广泛、高度的关注。左卡尼汀(Levocartine,LC)作为经典的改善能量代谢的药物,作用是携带长链脂酞通过线粒体内膜,促进三羧酸循环正常进行,辅助细胞的能量代谢。LC也是一种有效的氧自由基清除剂。能通过降低自由基水平、减轻钙超载发挥改善线粒体功能,促进代谢调整、抗凋亡的作用。但目前在缺血、缺氧情况下LC通过抗氧化作用改善心肌细胞代谢、抑制细胞凋亡研究国内外报道较少,因此本实验首先通过结扎大鼠冠状动脉左前降支建立缺血心衰动物模型,并给予LC干预,探讨其对心梗后心衰大鼠血清氧化应激酶学水平的影响,进一步探究其对非梗死区心肌细胞凋亡的影响及机制。另外,通过体外实验研究证实LC预处理过氧化氢(H2O2)诱导的H9c2大鼠心肌细胞氧化应激受到抑制,进而改善能量代谢。从整体、细胞、分子水平探讨左卡尼汀改善缺血心肌细胞能量代谢以及抑制心肌细胞凋亡的作用及机制,从而为缺血性心脏病发病机制的研究,以及优化心衰药物治疗方案提供理论依据。 通过研究 方法: 通过结扎雌性Wistar大鼠左冠状动脉前降支(Left anterior descending, LAD)建立心梗后心衰模型,存活的大鼠术后4周随机分为分为假手术(Sham operation,SO)组、模型(Myocardial infarction, MI)组、模型LC低剂量(MI-LC1)组、模型LC高剂量(MI–LC2)组共四组。各组按分组要求给予生理盐水及LC腹腔注射治疗,先后于给药后2周、4周后终止饲养,观察大鼠一般情况,检测如下指标:血流动力学参数包括:心率(HR)、左心室收缩末压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)和左室内压最大上升/下降速度(±dp/dtmax);观察心脏大体形态;全心肥厚指数与左心室重量指数;ELISA法测定血清中BNP、 SOD、MDA水平;免疫组化法检测非梗死组织Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达水平;以及Western Blot检测心肌细胞凋亡分子Bcl-2/Bax、Caspase-3以及线粒体途径相关分子细胞色素C(Cyt C)的蛋白表达水平改变,探讨左卡尼汀在体抗氧化应激的环节抑制心肌细胞凋亡的作用及机制。 同时应用H2O2诱导大鼠H9c2心肌细胞凋亡,加入不同浓度外源性LC预处理(分为空白对照组、单独LC组、H2O2模型组及H2O2模型加LC预保护组低、中、高组),检测以下指标:CCK-8法检测细胞活性,ELISA法检测心肌细胞氧化平衡体系相关酶包括ROS、乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA), SOD,GSH-PX含量;利用JC-1法检测细胞线粒体膜电位(△Ψm);以及细胞内ATP水平;PI/AV双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡水平;Western Blot检测Caspase-3、Bax/Bcl-2以及Cyt C蛋白表达水平。进一步探讨LC通过抑制氧化应激反应保护线粒体功能,改善心肌代谢,进而抑制细胞凋亡的作用及可能机制。 结果: 1动物实验研究结果:与假手术组相比,模型组大鼠外形失去了原有的几何形状,梗死区心肌瘢痕形成,明显变薄,纤维组织增生明显, LVEDP增高,LVSP和±dp/dtmax减低,左心室重量指数明显增加,血清心衰标记物BNP水平明显增高;与模型组比较,LC组LVEDP减低,LVSP和±dp/dtmax(mmHg/s)增高,左心室重量指数降低,纤维组织增生减少,血浆BNP水平下降,左卡尼汀改善心梗后心衰的血液动力学状态; 与假手术组相比,模型组大鼠细胞内MDA含量升高、SOD含量下降,应LC组可拮抗上述改变,证实了左卡尼汀有抗氧化应激的作用; 与模型组相比,LC组Caspase-3、Cyt C蛋白表达明显减少,抗凋亡分子Bcl-2蛋白表达明显增加,有效抑制了促凋亡分子蛋白Bax的表达。LC可能通过调节Bcl-2/Bax蛋白分子表达失衡,并且下调心肌组织Caspase-3、 Cyt C蛋白表达,进而抑制心肌细胞凋亡,改善心梗后心衰的心功能。 上述结果均提示LC高浓度组比低浓度组有更好的保护趋势。 2体外细胞实验研究结果:与对照组相比,H2O2模型组ROS、LDH、MDA含量升高,而SOD、GSH-Px含量下降,加入不同浓度外源性LC均抑制了细胞内ROS、LDH、MDA水平,促进了SOD、GSH-Px浓度的增加。 与H2O2模型组相比,LC预处理加H2O2模型组后的心肌细胞线粒体膜电位(△Ψm)的升高、细胞内ATP水平减少得到了明显的抑制; PI/AV双染流式细胞仪显示与对照组相比,H2O2模型组心肌细胞凋亡率明显增加, LC预处理加H2O2模型组后比模型组细胞凋亡率下降,Western Blot结果显示与对照组相比,H2O2模型组Caspase-3、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低;细胞线粒体凋亡途径标志性蛋白Cyt c蛋白表达增加;与之相比, LC预处理加H2O2模型组Caspase-3、Bax蛋白表达得到抑制,而Bcl-2蛋白表达升高; Cyt C蛋白表达明显下降。而且随着LC剂量增加,上述作用效果越佳。 结论: 1.缺血缺氧心肌存在的氧化应激酶系失衡,参与心肌细胞凋亡,导致心力衰竭。左卡尼汀可以通过抗氧化作用改善心肌凋亡。 2.左卡尼汀通过抗氧化作用,减少线粒体膜电位的下降,提高ATP水平,对心肌能量代谢有正向调节作用。 3.左卡尼汀可以下调Cyt C蛋白表达,通过线粒体途径抑制心肌细胞凋亡。同时下调促凋亡相关分子Bax、Caspase-3表达,上调抗凋亡分子Bcl-2表达。 4.左卡尼汀调节心肌能量代谢的作用有一定的剂量相关性。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 于学静;史为伍;张超;;左卡尼汀治疗糖尿病肾病微炎症状态的研究[J];中国中西医结合肾病杂志;2010年03期
2 王晓军;李淑琴;任善庆;黄漫军;;左卡尼汀治疗男性少弱精子症37例[J];广东医学;2007年11期
3 赵习玲;孟立军;王文英;;左卡尼汀的临床应用进展[J];实用心脑肺血管病杂志;2008年10期
4 宋宇春;刘永;徐琨;王艳;尚会强;李列宽;;血液透析患者静脉注射左卡尼汀24例疗效观察[J];贵州医药;2009年07期
5 徐洪实,米军颜,梅长林,陈蕾,王勇平;尿毒症血液透析患者的卡尼汀缺乏以及左卡尼汀的补充治疗作用[J];新医学;1999年08期
6 吕海宁,滕晓明;左卡尼汀治疗男性少、弱精子症临床观察[J];中华男科学;2005年06期
7 冯一,蔡威;左卡尼汀临床应用的研究进展[J];肠外与肠内营养;2005年05期
8 喻文琴;;左卡尼汀治疗慢性充血性心衰疗效分析[J];江西医药;2006年09期
9 韩华;;左卡尼汀治疗慢性心力衰竭43例疗效观察[J];中国现代药物应用;2009年22期
10 韦春望,陈孝治;雷卡[J];中国新药杂志;2002年03期
11 吴清洁;;左卡尼汀对血液透析患者营养不良和透析反应的改良作用[J];浙江医学;2007年04期
12 蒋贤武;陆国红;;左卡尼汀片处方及制备工艺研究[J];上海医药;2007年07期
13 赵强;;应用左卡尼汀治疗冠心病无症状心肌缺血的疗效观察[J];中国实用医药;2009年29期
14 朱春丽;张玉英;张伟国;;左卡尼汀改善原发性扩张性心肌病患者心功能的疗效观察[J];当代医学;2010年26期
15 吴小东;姜松;;左卡尼汀静脉注射对维持性血液透析病人的临床观察[J];中国社区医师(医学专业);2011年09期
16 黎琳;;左卡尼汀治疗慢性充血性心力衰竭的疗效观察[J];中国现代医药杂志;2011年07期
17 邵秀芬,严琳,汪江山,严拯宇;离子对RP-HPLC法测定左卡尼汀片剂的含量[J];药学进展;2004年03期
18 孙振高;连方;张建伟;牟善芳;;左卡尼汀联合氯米芬治疗少弱精子症45例疗效观察[J];山东医药;2007年20期
19 范存忠;;左卡尼汀改善原发性扩张型心肌病患者心功能的疗效观察[J];江苏医药;2007年11期
20 付瑶;常明;赵华;;左卡尼汀对老年维持性血液透析低血压的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2008年08期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郭柏松;杨春生;杨智;;冻干过程中重要因素对注射用左卡尼汀水分含量的影响[A];第十届全国冷冻干燥学术交流会论文集[C];2010年
2 李大奇;余雪芹;;左卡尼汀致精神障碍的临床特征[A];中华医学会精神病学分会第九次全国学术会议论文集[C];2011年
3 曹玉;朱莉;韩志武;王春波;;中国健康志愿者左卡尼汀及其代谢产物的药代动力学研究[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
4 肖峰;魏伟;干磊;吴成义;;盐酸丙酰左卡尼汀片在健康人体的药动学[A];第十二次全国临床药理学学术会议会议论文集[C];2010年
5 郑春辉;宋景春;;左卡尼汀治疗梗死后心绞痛的疗效分析[A];第十次中国中西医结合学会心血管病学术大会暨第五次江西省中西医结合学会心血管病学术大会论文汇编[C];2010年
6 梁敏;张文;魏庆旺;;左卡尼汀的药理学研究及临床应用进展[A];第十二届山东省药剂学术会议论文集[C];2006年
7 王德选;王丽;熊锡山;杨青;林瑞霞;;左卡尼汀对肾缺血再灌注损伤的保护作用[A];2008年浙江省肾脏病学术年会论文汇编[C];2008年
8 王德选;王丽;熊锡山;杨青;林瑞霞;;左卡尼汀对肾缺血再灌注损伤的保护作用[A];2008年浙江省儿科学学术年会论文汇编[C];2008年
9 李海松;韩亮;王彬;党进;孙松;;左归丸联合左卡尼汀治疗精液异常男性不育180例疗效观察[A];中华中医药学会第十一届男科学术大会论文集[C];2011年
10 吴清洁;;血液透析用药的观察及护理[A];全国内科护理学术交流暨专题讲座会议、全国心脏内、外科护理学术交流暨专题讲座会议、全国第8届糖尿病护理学术交流暨专题讲座会议、全国第8届血液净化护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 毛毳颖;左卡尼汀抗心肌细胞凋亡机制的实验研究[D];吉林大学;2014年
2 叶俊生;左卡尼汀在肾小管上皮细胞氧化应激损伤中的保护作用研究[D];南方医科大学;2010年
3 鹿成韬;1.1类新药“富马酸替诺福韦双特戊酯”和鹰嘴豆总生物碱抗肝炎药理学研究[D];第四军医大学;2012年
4 张冬;全国血液透析病例信息登记系统的建立及血液透析患者贫血治疗情况分析[D];中国人民解放军军医进修学院;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘彦儒;左卡尼汀对急性脑梗死患者临床疗效的观察[D];山西医科大学;2011年
2 李盛楠;左卡尼汀注射液对扩张型心肌病的辅助治疗作用及体内卡尼汀群的代谢研究[D];青岛大学;2013年
3 郭永忠;左卡尼汀对体外循环心脏手术患者心肌的保护作用[D];新疆医科大学;2010年
4 李颖;左卡尼汀对心肌细胞缺氧/缺血—再灌注损伤保护作用的实验与临床研究[D];广州医学院;2011年
5 董梅蓉;左卡尼汀注射液治疗慢性心力衰竭的合理用药研究[D];安徽医科大学;2013年
6 卢飞飞;左卡尼汀治疗缺血性心力衰竭疗效的研究[D];河北医科大学;2012年
7 米志宁;左卡尼汀对射血分数保留的心力衰竭的临床疗效评价[D];河北医科大学;2013年
8 孙振龙;左卡尼汀口服液对2型糖尿病肾病的治疗作用及体内代谢研究[D];青岛大学;2012年
9 李培蕾;左卡尼汀提高大鼠心肌梗死后移植骨髓间充质干细胞的存活和作用的影响[D];福建医科大学;2010年
10 朱付莲;左卡尼汀对维持性血液透析患者临床治疗作用[D];吉林大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张伦;左卡尼汀蹿红国际[N];医药经济报;2010年
2 ;智力改善药物的生力军:左卡尼汀[N];中国高新技术产业导报;2003年
3 ;智力改善药物左卡尼汀[N];中国中医药报;2003年
4 董耀平;左卡尼汀处方药市场潜力显现[N];中国医药报;2005年
5 张有平 王尔冉 本报记者 丁秀玉;顾书华与他的中医拯救行动[N];科技日报;2009年
6 金海 刘佳伟 记者 刘领;技术创新带动医药产业奔向高精尖[N];锦州日报;2008年
7 记者 薛婧;4个医药项目获国家3000万元支持[N];黑龙江日报;2008年
8 ;上市公司动向[N];深圳商报;2004年
9 记者 王方遒;四医药项目获国家“输血”[N];哈尔滨日报;2008年
10 蔡晓铭刘思辰;三公司利润受出口退税影响[N];证券时报;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978