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重楼与马鞭草提取工艺研究及对酒精性肝损伤大鼠的保护作用

张宁  
【摘要】:在对酒精性肝病的相关文献检索工作中,发现国内外报道的研究酒精性肝病及其相关药物的文献大多是基于传统中药单方以及复方,与现代医学理论下的治疗药物相比,传统中药对酒精性肝病的防治有其潜在的优势和广阔的前景,本课题对经典方剂中的中药进行筛选,以重楼与马鞭草组方,对其进行了混合提取工艺的研究;对大鼠进行酒精刺激与给药同时进行的实验模式,考察了重楼与马鞭草混合提取物对进行性酒精性肝损伤的预防作用,发现该实验模式下提取物有显著的肝损伤预防作用;对大鼠进行酒精刺激造成酒精性肝损伤模型,后给予提取物,考察其对已形成的酒精性肝损伤的药理作用并探讨其机制。一、实验方法1、药物提取(1)利用紫外分光光度法与高效液相方法分别建立马鞭草总黄酮与重楼皂苷Ⅰ的含量测定方法。(2)分别将马鞭草、重楼、两者混合物进行提取,通过已建立的测定方法考察混合提取过程中两者有无相互影响。(3)将重楼与马鞭草粉碎后等量混合,进行了乙醇浓度、液料比例、提取时间、提取次数的单因素实验,确定了单因素条件下的最佳提取条件。(4)围绕单因素实验最佳条件进行不同水平设置,固定提取次数为3次,进行三因素(乙醇浓度、料液比例、提取时间)三水平的正交实验,确定了最佳提取条件。(5)对最佳提取条件进行验证实验,以确定提取效果。2、酒精刺激下的肝损伤预防作用以上述提取物作为受试药物。对大鼠进行酒精刺激的同时,灌胃给予阳性对照药物以及高、中、低三个剂量受试药物,连续8周,对大鼠的生长情况、肝脏系数、血清ALT、AST、TC、TG以及肝组织SOD、MDA等指标进行观察,评价受试药物在酒精刺激下对肝损伤的预防作用。3、对酒精性肝损伤的保护作用以上述提取物作为受试药物。对大鼠进行酒精刺激8周,复制酒精性肝损伤模型,灌胃给予阳性对照药物以及高、中、低三个剂量受试药物,连续4周,对大鼠的生长情况、肝脏系数、肝脏病理切片观察、血清ALT、AST、TC、TG、i NOS、TNF-α以及肝组织SOD、MDA、GSH、CAT等指标进行观察,评价受试药物对酒精肝损伤的保护作用并进行机制探讨。二、实验结果1、药物提取(1)混合提取的过程中,两种药材的提取过程相对独立,对彼此无明显影响。(2)各个单因素提取实验确定的最佳提取条件分别为:乙醇浓度80%,液料比例30倍,提取时间2h,提取次数3次。(3)药物提取的正交实验确定的最佳提取条件为:乙醇浓度为70%,液料比例为25倍,提取时间为2.5h,提取次数为3次。(4)验证实验提取结果显示,马鞭草总黄酮的平均提取率为7.054%,RSD值为0.008;重楼皂苷Ⅰ的平均提取率为0.646%,RSD值为0.001。总提取率为7.670%,总收率高于各个单因素实验。2、酒精刺激下的肝损伤预防作用受试药物能够改善酒精刺激下大鼠的生长情况,降低肝脏系数;显著降低血清中的ALT、AST、TG水平,显著降低肝组织中MDA水平,显著升高SOD水平,对大鼠血清TC水平无显著作用。3、对酒精性肝损伤的保护作用受试药物能够改善酒精刺激下大鼠的生长情况,降低肝脏系数;显著降低血清中的ALT、AST、TG、i NOS、TNF-α水平;显著降低肝组织中MDA水平,显著升高SOD、GSH、CAT水平,对大鼠血清TC水平无显著作用;肝脏病理切片HE染色结果表明,受试药物可以显著改善肝细胞超微结构,降低肝脏细胞的坏死、肿胀以及脂肪变性。三、实验结论1、采用乙醇同时提取马鞭草总黄酮与重楼皂苷Ⅰ的方式切实可行,有一定推广意义。2、受试药物能够对抗酒精代谢过程中产生的大量游离自由基,降低肝脏氧化应激状态,保护肝脏膜系统,降低肝脏脂质过氧化,减少细胞损伤与细胞内容物的渗出,从而降低ALT与AST。3、受试药物能够消除游离自由基,降低肝脏氧化应激状态,使i NOS水平下调,防止更强自由基的生成,从而减少自由基清除剂SOD、抗脂质过氧化物质GSH、抗氧化酶CAT的消耗。4、受试药物能够减少自由基,上调抗氧化物质水平,减少酒精代谢过程对肝细胞膜的脂质过氧化反应,从而降低膜系统过氧化的终产物MDA水平。5、受试药物能够减少高氧化应激状态下的膜脂质过氧化反应,起到稳定膜系统的作用,使通过肝脏门脉系统入肝脏的内毒素、脂多糖减少,从而减少库普弗细胞与巨噬细胞的激活,下调炎性介质TNF-α水平,降低炎症反应对肝细胞的直接损伤。6、受试药物能够通过清除自由基、降低氧化应激状态、上调抗氧化物质水平、降低膜脂质过氧化反应、下调免疫介质水平等机制,纠治肝脏细胞,使之基本恢复正常生理状态,维持正常的生理功能,增强代偿机制,改善代谢情况,因酒精代谢而受影响的的糖、脂肪、蛋白质、核酸等物质也基本维持正常代谢,从而TG水平也出现下降。


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