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水貂阿留申病ELISA抗体检测试剂盒的研制及水貂阿留申病血清学调查

杨柳枝  
【摘要】:水貂阿留申病(Aleutian disease of mink,MAD)是慢性、消耗性传染病。是由水貂阿留申病毒[1](Aleutian mink disease parvovirus,AMDV)引起,该病毒具有自主复制能力,能使水貂的免疫细胞遭到侵害从而导致全身免疫系统功能紊乱。该病几乎遍布于世界各养貂国家,在我国某些貂群中血清阳性率可达50%~90%,各个年龄段水貂都易感,该病已成为水貂的重要传染病之一。目前我国使用的水貂阿留申病鉴定方法主是CIEP(Convection immunoelectrophoresis:对流免疫电泳),该方法检测成本较高,每次检测样品的数量也比较少,不方便进行大批量检测,并且多用于实验室检测。因此研发更高效、低廉的检测试剂盒,对貂场的净化以及该病的防控具有重要意义。本研究将反应原性和特异性鉴定良好的人工设计抗原肽段(命名为sd)在大肠杆菌BL21中诱导表达,经Niz+亲和层析柱纯化后再超滤浓缩,得到高纯度、反应原性好的sd重组蛋白,浓度为12 mg/ml。按照实验室已经建立的水貂阿留申病ELISA抗体检测方法,将此sd重组蛋白为包被抗原,组装了水貂阿留申病ELISA抗体检测试剂盒,并进行了试剂盒保存期、可重复性、特异性以及敏感性的评价。结果表明:试剂盒在-20℃条件下保存期为6个月,4℃条件下保存期为1个月。试剂盒能特异性的检测水貂阿留申病阳性标准血清,与犬瘟热病毒、水貂肠炎病毒、犬细小病毒、伪狂犬病毒等阳性标准血清均无交叉反应;用该试剂盒对水貂阿留申病标准阳性血清进行检测并于CIEP法作比较,结果表明灵敏度高于CIEP方法;重复性试验表明,试剂盒批内差异系数为0.667%~5.811%,批间差异为0.882%~6.046%,小于10%,说明试剂盒批间、批内可重复性好。用研制的ELISA试剂盒与CIEP检测方法同时检测实验室所保存的379份水貂血清。结果显示sd-ELISA试剂盒检测方法检出阳性率是:82.3%,而CIEP阳性检出率为是:74.6%。用该方法对我国山东、大连、吉林、黑龙江、河南等主要养貂区域的2190份血清进行阿留申病血清学调查,各地感染率存在明显差异,分别为:96.3%、82.1%、71.2%、64.2%、69.8%。实验结果表明sd-ELISA试剂盒具有可重复性好,特异性强、灵敏度高等特点,其检测效果与CIEP相比,价格低廉,可批量操作,能够满足我国水貂场、散养户以及进出口检验检疫的实际需要。


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