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黑虎掌菌子实体粗多糖制备及其生物活性研究

徐盼菊  
【摘要】:黑虎掌菌,学名枣翘鳞肉齿菌(Sarcodon imbricatus(l.ex Fr.)Karst),在我国历史上被称为国宝珍品。本文主要针对四川和云南两产地的黑虎掌菌粗多糖提取得率及其生物活性进行研究与比较。首先,热水浸提法提取黑虎掌菌子实体粗多糖(Sarcodon imbricatus polysaccharides,SP,其中YSP-云南;SSP-四川),响应面法建立多糖提取得率(Y)与提取温度(X1)、提取时间(X2)以及水料比(X3)之间的二次多项式回归方程。实验结果显示,最优提取条件为YSP:提取时间为3.1 h,提取温度为91℃,水料比为60:1,多糖得率为16.75%;SSP:提取时间为3.1 h,提取温度为93℃,水料比为58:1,多糖得率为13.93%,明显高于目前已报道的黑虎掌菌粗多糖最高提取率11%。以黑虎掌菌子实体乙酸乙酯相、正丁醇相及多糖相作样品,黑曲霉菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌以及地杆菌作供试菌,抑菌圈法检测各相的抑菌活性。结果显示:四川黑虎掌菌乙酸乙酯相对枯草芽孢杆菌、地杆菌、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌均有一定的抑菌活性,且枯草芽孢杆菌的抑菌效果最为明显(抑菌圈直径12 mm),而正丁醇相和多糖相均无明显的抑菌效果;云南黑虎掌菌乙酸乙酯相对地杆菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌及铜绿假单胞杆菌有抑菌活性,且地杆菌的抑菌抑菌效果最为显著(抑菌圈直径14mm),同样正丁醇相和多糖相无明显的抑菌效果。以YSP与SSP为样品,Vc为阳性对照,羟基、DPPH以及超氧阴离子自由基清除率为检测指标,评价两个产地黑虎掌菌粗多糖体外抗氧化活性。结果显示:黑虎掌菌粗多糖的抗氧化活性表现出一种浓度依赖性。其中SSP的DPPH、超氧阴离子及羟基自由基最高清除率分别为:86.14%、71.78%和99.98%,均高于对应的YSP清除率76.54%、58.52%和99.93%,且两者的羟基自由基清除率均高于Vc(87.97%),但DPPH自由基和超氧阴离子清除率均低于Vc(94.71%和99.57%)。而对四川黑虎掌菌进行不同方法提取,所得SSP(水提)与SSP-1(酶提),比较其抗氧化活性,结果显示:SSP-1的抗氧化各指标均高于SSP,而且SSP-1的DPPH自由基最高清除率(99.91%)高于Vc(94.71%)。以体外生物活性检测结果为基础,研究SSP的小鼠体内抗氧化及增强免疫力活性。建立小鼠免疫抑制模型,黄芪多糖(AP)作阳性对照,检测血清及肝匀浆中MDA、SOD、GSH-Px和T-AOC水平,推断SSP体内抗氧化能力。同时以小鼠免疫器官指数、足后趾迟发性变态反应(DTH)、血清中免疫球蛋白和IL-2的生成水平及氧化因子水平为指标,评价SSP免疫力活性;结果显示:SSP通过增加血清中免疫球蛋白和免疫因子水平,增强胸腺和脾脏的器官指标,并中和氧化应激反应,提高环磷酰胺诱导免疫抑制小鼠的免疫力。


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