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低聚糖复合物对ARPE-19细胞及小鼠的抗氧化活性研究

盛雪  
【摘要】:视网膜色素上皮(RPE)细胞的退化是年龄相关性黄斑变性(AMD)的临床标志。随着线粒体氧化磷酸化减少,RPE细胞代谢障碍及功能异常,从而导致AMD发生发展。RPE细胞的氧化损伤是AMD病理机制中的主要原因。本论文首先利用H_2O_2建立ARPE-19细胞氧化损伤模型,通过细胞活力检测,细胞凋亡形态学观察,SOD活性、GSH和MDA含量测定,ROS及线粒体膜电位检测,探究了低聚糖复合物(OSC)在ARPE-19细胞内的抗氧化能力。实验结果表明,当利用不同浓度的OSC作用后,H_2O_2引起的ARPE-19细胞的氧化应激水平明显减弱,并呈剂量依赖性。当OSC浓度为250μg/mL时,细胞活力升高了19%,凋亡形态明显减弱。SOD活性和GSH含量分别恢复至对照组的94.8%和90.1%,MDA含量和ROS含量分别下降至对照组的1.47倍和1.4倍,线粒体膜电位显著升高。这一研究表明OSC在ARPE-19细胞内具有一定的抗氧化能力。然后,利用乙醇建立小鼠氧化损伤模型,通过血清中SOD的活性、GSH和MDA的含量测定,探究了OSC对乙醇损伤小鼠的抗氧化作用。实验结果表明,当给予0.8g/kg的OSC时,SOD活性和GSH含量分别恢复至对照组的94.1%和100.1%,而MDA含量下降至对照组的1.49倍。这种作用结果说明OSC在小鼠体内也有很好的抗氧化功能,可以抵御乙醇对小鼠造成的氧化损伤。最后,为了研究OSC的抗氧化机制,我们利用Western Blot检测ARPE-19细胞和小鼠的肝脏及眼球中的SIRT1及PGC-1α蛋白表达水平。实验发现,当OSC浓度为250μg/m L时,ARPE-19细胞中SIRT1及PGC-1α的表达量分别比H_2O_2损伤组增加了31.6%和23.7%。当给予0.8g/kg的OSC喂食小鼠时,小鼠肝脏和眼球的SIRT1蛋白表达量分别比对照组上调了23.3%和35.2%,PGC-1α蛋白表达量分别比对照组上调了13.6%和11.5%。说明OSC可以显著活化SIRT1/PGC-1α信号通路,从而抵御氧化损伤。综上所述,OSC具有保护H_2O_2氧化损伤的ARPE-19细胞和乙醇氧化损伤的小鼠的功能,通过活化SIRT1/PGC-1α信号通路,抵御氧化损伤。因此,OSC可以成为预防和治疗AMD的一种潜在药物。


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