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长链非编码RNA HOTAIR对肝细胞癌生长及糖代谢的影响

胡月雷  
【摘要】:研究目的:肝细胞癌的发生与发展是多个复杂因素共同作用的结果,目前研究表明长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)对肝细胞癌的发生及发展有着重要的影响。结合糖代谢改变是肿瘤细胞代谢变化的主要特征之一,本研究旨在探讨HOTAIR对肝细胞癌生长及糖代谢的影响,为肝细胞癌的治疗提供新的方向。研究方法:以人正常肝细胞株HL-7702和肝癌细胞株SMMC-7721和HepG-2为研究对象。构建siRNA-HOTAIR和siRNA-scramble载体,慢病毒感染SMMC-7721和Hep G-2细胞。实验分为HOTAIR基因沉默实验组(si-HOTAIR)及scramble基因沉默对照组(NC)。实时定量荧光聚合酶链式反应检测HOTAIR、miR-217、糖酵解相关酶葡萄糖-6-磷酸异构酶、丙酮酸激酶M2及乳酸脱氢酶A,缺氧诱导因子-1α,受体酪氨酸激酶AXL及上皮间质转换相关因子E-钙粘蛋白和波形蛋白的转录水平;MTT法检测肿瘤细胞的增殖活力;应用Transwell小室分别检测肿瘤细胞的侵袭与迁移能力;应用葡萄糖和乳酸检测试剂盒检测葡萄糖的消耗率与乳酸生成率;利用Western blot技术检测糖酵解相关酶葡萄糖-6-磷酸异构酶、丙酮酸激酶M2及乳酸脱氢酶A,缺氧诱导因子-1α,AXL及上皮间质转换相关因子E-钙粘蛋白和波形蛋白的翻译水平。研究结果:在SMMC-7721和HepG-2细胞中HOTAIR的表达水平明显高于HL-7702细胞中HOTAIR的表达水平;在SMMC-7721和Hep G-2细胞中,与阴性对照组比较si-HOTAIR组细胞HOTAIR的表达下降(P0.05),miR-217的表达上调(P0.05);si-HOTAIR组SMMC-7721和Hep G-2细胞的增殖能力下降(P0.05);侵袭及迁移能力减弱(P0.05);葡萄糖消耗率及乳酸生成率下降(P0.05);转录水平表达情况:糖酵解相关酶(葡萄糖-6-磷酸异构酶,丙酮酸激酶M2,乳酸脱氢酶A)表达水平下调(P0.05),缺氧诱导因子-1α和AXL表达水平下调,上皮间质转换相关因子(波形蛋白水平下调(P0.05);E-钙粘蛋白水平表达上调(P0.05))。蛋白水平表达情况:糖酵解相关酶(葡萄糖-6-磷酸异构酶,丙酮酸激酶M2,乳酸脱氢酶A)表达水平下调,缺氧诱导因子-1α及AXL表达水平下调,上皮间质转换相关因子波形蛋白的蛋白水平下调;E-钙粘蛋白在蛋白水平表达上调。研究结论:HOTAIR在肝癌细胞系中的表达高于正常肝细胞系,并与肝细胞癌的恶性生物学行为有关。沉默HOTAIR的表达可以通过抑制糖酵解相关酶葡萄糖-6-磷酸异构酶,丙酮酸激酶M2,乳酸脱氢酶A的表达来抑制肝癌细胞的糖代谢。我们的结果提示HOTAIR对肝细胞癌的生物学行为和糖代谢的调节可能与miR-217/缺氧诱导因子-1α/AXL轴有关。


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