收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

牡蛎多肽提取工艺的建立及其对RAW264.7巨噬细胞免疫调节作用的研究

逯冠宏  
【摘要】:牡蛎是典型的暖水性无脊椎双壳贝类,是微量元素、必需脂肪酸、蛋白质、糖原、氨基酸等多种营养素的良好来源。除了这些营养物质外,牡蛎具有多种生物活性和药用价值,是具有保健作用的药食同源食品,尤其是经过蛋白酶水解后制备的牡蛎蛋白水解物或牡蛎多肽,具有降血压、降血糖、抗肿瘤、抗氧化、生殖保健、增强免疫力等多种重要的生物活性。但目前多数的牡蛎以生鲜方式或简单的生产加工方式售卖,牡蛎资源并没有得到充分有效的开发,造成了资源的浪费。因此,近年来大量营养学和医学领域研究学者将目光投入到对牡蛎生物活性的研究和利用上,为牡蛎高附加值活性物质的利用以及牡蛎多肽功能食品的研发提供了技术支撑,是未来牡蛎加工产业的发展方向。具有免疫调节作用的多肽称为免疫活性肽,具有低分子量、低毒、低敏、无副作用和易于被人体吸收等多种优势,因此研究免疫活性肽已经成为相关领域的一个研究热点。本文以牡蛎为原料,选取木瓜蛋白酶、风味蛋白酶和动物蛋白酶通过酶解法和超滤制备三种牡蛎多肽,在小鼠巨噬细胞RAW264.7上对其免疫活性进行初步评价,以此筛选出制备免疫活性肽最佳的水解酶。进一步通过单因素和响应面实验对酶解的p H值、加酶量、温度、底物浓度和时间以水解度为指标进行优化,建立提取多肽的最佳工艺。实验结果表明,动物蛋白酶酶解牡蛎多肽(AOP)比木瓜蛋白酶酶解牡蛎多肽(POP)和风味蛋白酶酶解牡蛎多肽(FOP),能显著提高RAW264.7细胞的增殖率(P0.01),500μg/m L浓度的AOP对细胞的增殖率为(110±1.775)%;并发现三种牡蛎多肽在低浓度500μg/m L时均能激活巨噬细胞,极显著增强巨噬细胞吞噬中性红的活力(P0.01),对吞噬活性影响由大到小依次是AOPFOPPOP;同时AOP酶解多肽在500μg/m L和50000μg/m L时巨噬细胞NO的释放量也是三者中最高的,呈浓度依赖性上升。以上结果说明AOP具有最佳的免疫增强活性。进一步确定AOP最佳提取工艺为加酶量3000U/g、底物浓度20%、酶解温度51℃、酶解时间4h和p H值7.6。利用最佳提取工艺制备牡蛎多肽粗提液,超滤分离获得纳滤浓缩液,之后真空冷冻干燥获得AOP冻干粉,并对其理化性质进行检测分析,实验结果显示,AOP的紫外最大吸收峰出现在220nm处,傅里叶红外光谱显示AOP具有多肽的特征吸收峰;利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)分析相对分子量分布,结果显示分子量1000Da的多肽占比54.3%;液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)鉴定出多种多肽序列,我们对AOP中含量相对较高的前16个序列进行检索和分析,发现7种肽序列均来自铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD),该物质已经被证实是一种参与机体抗氧化免疫反应的酶类,另外一种来自HSC70蛋白的肽序列,具有提高机体免疫力,参与免疫调节的作用;氨基酸分析结果显示疏水性氨基酸分别占AOP中水解氨基酸的28.45%、游离氨基酸的17.3%。通过AOP对细胞增殖的影响、吞噬中性红的能力、NO释放量的影响以及相关细胞因子(IL-6、i NOS、IL-1β、TNF-α)基因的表达量影响,研究不同浓度AOP对细胞免疫调节作用的影响,结果表明250μg/m L和1250μg/m L两种浓度的AOP能够促进RAW264.7细胞的增殖、增强其对中性红的吞噬能力和促进释放NO、上调i NOS m RNA、IL-6 m RNA、IL-1βm RNA、TNF-αm RNA基因的表达水平。进一步采用Western blot法研究其免疫调节机制,结果表明AOP能够通过激活p38、JNK MAPK信号通路,促进相关免疫细胞因子的分泌,从而调节免疫活性。综上所述,本研究建立了牡蛎多肽的提取工艺,经超滤分离得到牡蛎多肽AOP,初步研究表明AOP能够增强RAW264.7细胞的免疫活性,为牡蛎功能性食品的开发和利用提供了新思路。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前15条
1 王莹;金红宇;李耀磊;董晓旭;昝珂;马双成;;不同分子量枸杞多糖对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用[J];中国新药杂志;2021年12期
2 傅明明;郭姣;;橙皮苷对RAW264.7巨噬细胞泡沫化及ICAM-1表达的影响[J];世界科学技术-中医药现代化;2017年03期
3 俞建;胡文志;季玲;孙烈;;葛根素抑制脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞表达诱导型一氧化氮合酶[J];中国康复理论与实践;2010年09期
4 史佳鹭;李柏良;岳莹雪;关嘉琦;赵莉;梁胜男;赵丽娜;霍贵成;;混合乳杆菌对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞的抗炎作用[J];食品科技;2021年05期
5 韩曾姣;贺家勇;常军民;;刺糖精多糖对巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响研究[J];新疆医科大学学报;2017年03期
6 李燕;陈德胜;郭凤英;夏根;付斌;周芙标;;钛颗粒对RAW264.7巨噬细胞增殖及炎性因子表达的影响[J];宁夏医科大学学报;2016年12期
7 乔运成;黄谙非;田国平;刘晓辉;袁中华;;脂肪分化相关蛋白促进RAW264.7细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1高表达[J];中国动脉硬化杂志;2009年08期
8 徐道华;刘培庆;徐素文;;丹皮酚对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响[J];时珍国医国药;2012年06期
9 何玲楠;李兵航;周达;梁灿灿;丁永年;陈源文;范建高;;甘丙肽体外抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞促炎功能研究[J];实用肝脏病杂志;2016年03期
10 王春;许灿新;严鹏科;陈琳玲;李凯;廖端芳;;巨噬细胞集落刺激因子对RAW264.7细胞基质金属蛋白酶9分泌的影响[J];中国动脉硬化杂志;2006年02期
11 庞战军,周玫,陈瑗;巨噬细胞集落刺激因子对RAW264.7细胞谷胱甘肽过氧化物酶活性及其基因表达的影响[J];中国动脉硬化杂志;2000年02期
12 刘莉园;张钊;葛乃嘉;全吉淑;;草苁蓉多糖对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响[J];中国药学杂志;2021年18期
13 于永忠;柳婧;孙虎男;冯丽;崔玉东;;羊口疮病毒感染对巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响[J];中国畜牧兽医;2013年07期
14 吕瑜峰;王亮;张佳慧;帖航;孙佩佩;吴子健;;卵黄高磷蛋白的纯化及其对RAW264.7生长形态的影响[J];食品研究与开发;2012年12期
15 俞晓丽;郭兰芳;陈璐;闻平;;β-葡聚糖对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的免疫刺激作用[J];中国微生态学杂志;2009年10期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 杨江涛;佟建明;刘晴雪;;苜草素对小鼠巨噬细胞RAW264.7β-防御素基因表达的影响[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
2 张琳琳;孟杰;朱亚兵;杜以帅;熊志强;竺奇慧;方晓东;李莉;张国范;;长牡蛎生理防御反应的组学研究[A];中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表大会暨第十五次学术讨论会会议摘要集[C];2011年
3 杜以帅;王晓通;张琳琳;李莉;张国范;;长牡蛎对干露的适应机研究[A];中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表大会暨第十五次学术讨论会会议摘要集[C];2011年
4 才让卓玛;赵云涛;章超桦;苏阳;;香港巨牡蛎外壳中δ~(13)C值的分析及其在产地溯源中的应用研究[A];2014年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2014年
5 李龙;曹敏杰;张凌晶;苏文金;陈小峰;刘光明;;玛咖提取物对巨噬细胞RAW264.7吞噬功能的影响[A];中国食品科学技术学会第十一届年会论文摘要集[C];2014年
6 覃丽;胡蓉;姚海伦;凌红艳;廖端芳;;wnt5a对荷脂巨噬细胞RAW264.7中胆固醇蓄积的影响及相关机制[A];传承与发展,创湖南省生理科学事业的新高——湖南省生理科学会2011年度学术年会论文摘要汇编[C];2011年
7 谭小华;杨杏芬;黄琼;;敌匹硫磷与双酚A单独与联合暴露对RAW264.7细胞毒性的实验研究[A];中国毒理学会第五次全国学术大会论文集[C];2009年
8 赖世翔;陈良娇;张清彬;曹威;崔诗曼;黎星阳;;硅酸二钙对小鼠巨噬细胞系RAW264.7的促炎反应机制研究[A];中华口腔医学会全科口腔医学专业委员会第八次学术会议论文集[C];2017年
9 许飞;李莉;张国范;;光照对牡蛎幼虫生长存活的影响[A];中国动物学会、中国海洋湖沼学会贝类学会分会第十四次学会研讨会论文摘要汇编[C];2009年
10 杨丽娜;刘志宏;张晶;宋洪涛;;雷公藤次碱对脂多糖诱导RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响[A];2014年中国药学大会暨第十四届中国药师周论文集[C];2014年
11 肖湘;韩雅莉;李兴暖;黄长江;;三丁基锡对牡蛎超氧化物歧化酶的影响[A];第六届全国SOD学术研讨会论文集[C];2009年
12 郑金土;徐嘉雄;蒋国强;;不同生态条件下柏牡蛎蚧对杨梅的危害程度[A];中国园艺学会首届青年学术讨论会论文集[C];1994年
13 杨江涛;董晓芳;佟建明;刘晴雪;张琪;吴莹莹;;苜草素多糖、黄酮和皂苷对小鼠巨噬细胞RAW264.7β-防御素基因表达的影响[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
14 林心宇;黄小红;黄一帆;;姜黄素对氧化损伤RAW264.7细胞的保护作用研究[A];福建省畜牧兽医学会2017年学术年会论文集[C];2017年
15 程秀丽;丁帆;闫莉;谷婧丽;郝维;高雪;曹济民;;促离子型谷氨酸受体介导RAW264.7巨噬细胞释放TNF-α[A];第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2011年
16 刘程林;霍波;季葆华;;Raw264.7细胞在流体剪切力作用下的迁移及其机制研究[A];北京力学会第20届学术年会论文集[C];2014年
17 黄舒颖;张诚;黄自坤;罗清;卿城;;lncRNA NEAT1在结核分枝杆菌感染RAW264.7巨噬细胞中的表达及作用的初步探讨[A];第十三届全国免疫学学术大会摘要汇编[C];2018年
18 王晓通;宋小瑞;黄荣莲;王桐;李莉;张国范;;长牡蛎贝壳形成机制的组学探讨[A];中国动物学会·中国海洋湖沼学会贝类学分会第九次会员代表大会暨第十五次学术讨论会会议摘要集[C];2011年
19 王艳;郑群;王一松;朱俊萍;曹宁;平国玲;张力平;;链球菌蛋白对RAW264.7小鼠巨噬细胞活性的调节作用[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年
20 陈旭林;郭峰;王飞;王永杰;;不同浓度的AngⅡ对RAW264.7巨噬细胞AT1受体表达的影响[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前20条
1 朱洁萍;睾酮对小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症因子表达的影响及分子机制研究[D];复旦大学;2009年
2 任桂红;小刺猴头菌发酵浸膏多糖和寡糖的分离纯化及对RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用[D];吉林农业大学;2018年
3 李兴霞;长牡蛎左右外套膜的分子差异研究[D];沈阳农业大学;2017年
4 颜冬菁;Daintain在巨噬细胞RAW264.7中的功能研究[D];华中科技大学;2011年
5 姚托;长牡蛎、葡萄牙牡蛎与近江牡蛎的种间杂交研究[D];中国海洋大学;2014年
6 于春微;酿酒酵母β-葡聚糖对RAW264.7细胞氧化应激、炎症和凋亡的缓解作用及机制[D];内蒙古农业大学;2021年
7 王海艳;中国近海常见牡蛎分子系统演化和分类的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2004年
8 胡利莎;中国近海缘曲牡蛎科和其他部分属种的分类及猫爪牡蛎系统地理学研究[D];中国科学院大学(中国科学院海洋研究所);2020年
9 刘兆群;长牡蛎神经内分泌免疫系统调节机制的初步研究[D];中国科学院大学(中国科学院海洋研究所);2017年
10 辛鲁生;长牡蛎白介素17及其信号通路分子的作用机制[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2016年
11 王晓慧;1.抑制糖皮质激素受体表达导致小鼠巨噬细胞系RAW264.7增殖加快的分子机制 2.非基因毒应激对RhoB的诱导作用及其生物学意义[D];第二军医大学;2005年
12 王伟林;长牡蛎免疫适应性(免疫致敏)机制的初步研究[D];中国科学院大学(中国科学院海洋研究所);2017年
13 王金鹏;牡蛎生长与高温耐受性状的遗传解析[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2016年
14 刘淑清;TLR2介导TB10.4激活RAW264.7通路及细胞因子表达的研究[D];中国农业科学院;2014年
15 宋健;脂质筏参与巨噬细胞Raw264.7介导的低密度脂蛋白的氧化[D];武汉大学;2016年
16 栾弘;泛福舒通过TLR4和TLR2介导的ERK1/2/NF-κB通路上调RAW264.7细胞炎症因子的表达[D];华中科技大学;2014年
17 刘聪辉;长牡蛎免疫球蛋白超家族(IgSF)成员结构与功能的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2016年
18 苏家齐;葡萄牙牡蛎与熊本牡蛎、僧帽牡蛎的种间杂交研究[D];中国海洋大学;2015年
19 丛日浩;长牡蛎快速生长品系选育及重要功能基因与生长和糖原含量相关性研究[D];中国海洋大学;2014年
20 秦超超;MIP-2对LPS诱导的巨噬细胞反应的作用及机制研究[D];浙江大学;2017年
中国硕士学位论文全文数据库 前20条
1 逯冠宏;牡蛎多肽提取工艺的建立及其对RAW264.7巨噬细胞免疫调节作用的研究[D];吉林大学;2021年
2 郭峰;血管紧张素Ⅱ1型受体在RAW264.7巨噬细胞中的表达及其在炎症介质产生中的作用[D];安徽医科大学;2009年
3 李宗球;几丁寡糖对RAW264.7小鼠巨噬细胞的免疫调节作用[D];华南理工大学;2020年
4 宋舟;中药方剂香芪汤对RAW264.7巨噬细胞炎症信号通路的调节机制研究[D];吉林大学;2013年
5 唐中元;磷酸肌酸对脂多糖诱导的RAW264.7的抗炎作用初步研究[D];吉林大学;2020年
6 于红红;四妙勇安汤含药血清对RAW264.7巨噬细胞自噬的影响[D];贵阳中医学院;2015年
7 沈阳;栀子苷对巨噬细胞RAW264.7内吞功能及细胞极化的影响研究[D];南京医科大学;2019年
8 曲英晶;山东荣成牡蛎产业结构与特征初步研究[D];中国海洋大学;2013年
9 安琪;青钱柳多糖对RAW264.7细胞的抗氧化和抗炎作用及机理探究[D];江西农业大学;2020年
10 李志;牡蛎多糖的分离纯化及生物学活性研究[D];福建农林大学;2009年
11 张帅;刺参岩藻聚糖硫酸酯对RAW264.7细胞炎症和自噬的影响[D];西北农林科技大学;2021年
12 王洁;林蛙骨肉小肽的制备与结构鉴定及其对RAW264.7细胞的免疫调节作用[D];吉林大学;2020年
13 石璇;牡蛎多糖生产工艺研究及其年产1000kg车间设计[D];大连海洋大学;2016年
14 聂建巍;γ-干扰素增强RAW264.7巨噬细胞吞噬、杀伤阿萨希毛孢子菌的实验研究[D];安徽医科大学;2012年
15 张聪;褶牡蛎对重金属的富集与释放规律及相关安全限量研究[D];上海海洋大学;2012年
16 郭兰芳;β-葡聚糖对小鼠单核—巨噬细胞系RAW264.7作用的研究[D];江苏大学;2008年
17 巫楚君;黄鳍金枪鱼酶解肽的制备、鉴定及其对RAW264.7细胞免疫调节活性研究[D];广东药科大学;2021年
18 李金霞;桦褐孔菌多糖对弓形虫感染RAW264.7细胞信号通路调控作用的硏究[D];延边大学;2019年
19 周光普;环磷酰胺在布鲁氏菌M5侵染小鼠/巨噬细胞RAW264.7过程中的作用[D];石河子大学;2019年
20 张瑞;PLIN2通过内质网应激/SREBP2介导Ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞内脂质蓄积[D];南华大学;2019年
中国重要报纸全文数据库 前20条
1 通讯员 冯文波;牡蛎产业收获高端“土豪金”[N];中国海洋报;2019年
2 本报记者 廖洋 通讯员 冯文波;牡蛎家族的“土豪金”[N];中国科学报;2019年
3 ;新加坡对冷冻牡蛎提出进口要求[N];中国国门时报;2007年
4 记者 马爱平;国内首创牡蛎机收平台 “小麦式”收割将采收率提至99%[N];科技日报;2021年
5 本报记者 徐若滨;牡蛎大量上市受热捧[N];新农村商报;2016年
6 本报记者 王志强 通讯员 王宇;减产价蹿高 牡蛎变“金贵”[N];威海日报;2011年
7 本报记者 张丽华通讯员 刘国贤 迟诚勇;内外兼修,做强牡蛎产业[N];威海日报;2008年
8 本报记者 黄如飞 杨凌怡 通讯员 沈启寒;小牡蛎“长”出致富希望[N];福建日报;2021年
9 记者 廖洋 通讯员 王敏;中科院海洋研究所 构建长牡蛎高质量基因组和变异图谱[N];中国科学报;2021年
10 本报记者 夏树刚 通讯员 单晓鸾;小牡蛎串起大产业链[N];威海日报;2016年
11 ;牡蛎肽的功能特性及应用[N];中国食品报;2015年
12 通讯员 朱海洋 记者 潘剑凯;杭州工地挖出大批古生长牡蛎[N];光明日报;2012年
13 记者 冯敏;研讨牡蛎产业发展[N];北海日报;2010年
14 本报记者 廖洋 通讯员 冯文波;“海大1号”诞生记[N];中国科学报;2014年
15 ;法国牡蛎市场价格稳定[N];中国渔业报;2008年
16 记者 曲唐;今年我市首批牡蛎进入香港市场[N];威海日报;2007年
17 冯亦珍 朱星华;六百亿只小牡蛎帮长江口“疗伤”[N];新华每日电讯;2003年
18 记者 许琦敏;活跃基因诠释牡蛎生存智慧[N];文汇报;2012年
19 记者 刘传书;多组学研究揭示牡蛎抗逆能力及其外壳形成机制[N];科技日报;2012年
20 本报记者 刘瑾 通讯员 刘国贤 任现辉;乳山牡蛎:“秋播春收”解难题[N];经济日报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978