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贡菜提取物抗真菌活性实验研究

甄清  
【摘要】:医院感染中,医学真菌感染问题非常严重,随着广谱抗生素、抗肿瘤药物、免疫抑制剂等的广泛使用,器官移植、导管插入和放射治疗的不断发展,尤其是人类免疫缺陷病毒(HIV)的感染,患者免疫功能的降低或缺陷,使原来认为是条件致病性真菌引起的感染情况日益增多,真菌感染已成为医院感染发病率和病死率增高的重要原因。对于浅部真菌感染治疗的药物研究已取得一定进展,但对于深部真菌感染治疗的药物研究相对滞后,不能满足临床需要。目前应用于临床的抗真菌药物以化药为主,存在的主要问题是毒副作用大及耐药菌株的出现,寻找高效、广谱、低毒的抗真菌药物是药物学家研究的重要方向。其中从天然产物中寻找新的抗真菌活性成分,并发现新的作用靶点,已成为研究热点。目前已发现一些中草药和植物中存在抗真菌活性成分,其中大蒜素已应用于抗深部真菌感染。对于贡菜的化学成分初步分析表明贡菜中含有糖类、生物碱、酚类及黄酮类等物质,为确定贡菜的抗真菌活性部位,本研究采用不同提取方法对贡菜干品进行浸提,以临床上常见的浅部感染和深部感染真菌为受试菌株,对贡菜不同提取液及浸膏进行了体外抗真菌试验研究,并探讨了溶剂及温度对贡菜抗菌试验结果的影响,进一步探讨了其可能的作用机制。 1 贡菜乙醇提取液抗微生物试验研究中发现,贡菜中存在广谱抗微生物作用的成分。 1.1 乙醇提取液对青霉菌、黑曲霉、黄曲霉均有抑制和杀灭作用,其最低抑菌浓度(MIC)为125μl/ml、最低杀菌浓度(MBC)值为250μl/ml。这为进一步研究贡菜抗病原性真菌活性提供了实验依据。 1.2 乙醇提取液对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大 WP=37 肠杆菌、志贺痢疾杆菌、副伤寒杆菌、变形杆菌均有不同程度的抑制和杀灭作用, MIC值范围为31~125μl/ml、MBC值范围为31~125μl/ml。其中枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌和金葡菌敏感性较低,肠杆菌科细菌较敏感。 2 本研究应用1:1丙酮水溶液对贡菜干品进行冷浸提方法,并对该浸提液进行乙酸乙酯萃取,应用试管法对样液进行对倍稀释,进行体外抗真菌试验,实验结果表明贡菜乙酸乙酯萃取部位存在广谱抗真菌活性成分,对犬小孢子菌、絮状毛癣菌等浅部真菌较敏感,对白色念珠菌、曲霉菌等深部感染真菌敏感性较低。 2.1 乙酸乙酯萃取液A液,对白色念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉、短帚霉、石膏小孢子菌、犬小孢子菌均有不同程度的抑制和杀灭作用,其抗真菌范围为15~125μl/ml,且MIC和MBC值等同。 2.2 乙酸乙酯萃取液B液,对白色念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、短帚霉、石膏小孢子菌、犬小孢子菌、须发毛癣菌、絮状毛癣菌均有不同程度的抑制和杀灭作用,其抗真菌范围为7.5~125μl/ml,且MIC和MBC值等同。 2.3 乙酸乙酯萃取液B液减压蒸去溶剂制得浸膏,用DMSO溶解,对上述受试菌种进行抗真菌试验研究,对白色念珠菌、新生隐球菌、烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、短帚霉、石膏小孢子菌、犬小孢子菌、须发毛癣菌、絮状毛癣菌的最低抑制和杀灭浓度为12.5~200μg/ml。 3 贡菜的水浸液进行抗微生物试验研究,未发现有抗微生物作用。 4 贡菜丙酮提取液浸膏的水溶液进行试验,未发现有抗真菌作用。 5 溶剂、温度等因素对贡菜抗真菌活性有影响 5.1 在贡菜提取过程中使用丙酮、乙酸乙酯及乙醇作为提取溶剂,二甲基亚砜作为浸膏溶剂。贡菜提取样液已挥去大部分提取溶剂,残留溶 WP=38 剂经培养液对倍稀释的终浓度,对各受试菌种影响可忽略。二甲基亚砜作为浸膏溶剂,对受试菌种作用的二甲基亚砜的终浓度低于二甲基亚砜直接作用浓度,可忽略其影响。 5.2 对贡菜乙酸乙酯萃取液进行不同温度处理,80℃、100℃、121℃处理15min对白色念珠菌的抗菌活性与未处理的样液无差别,将浸膏121℃干烤24h,溶解于DMSO后高压灭菌,对各受试菌种的MIC值与DMSO抗真菌结果无差别,认为较长时间高温处理对乙酸乙酯萃取的有效成分活性会破坏。 6 对于贡菜乙酸乙酯萃取部位的抗真菌活性机理尚不清楚,乙酸乙酯萃取的成分可能为低分子量植物多酚,植物多酚具有与蛋白质结合能力,也可与真菌代谢酶结合,从而影响真菌代谢活性。有关于贡菜的抗真菌作用机制还有待于进一步研究。 本实验结果表明,贡菜中存在广谱抗真菌活性成分,乙酸乙酯萃取部位对6属10个真菌菌株均有不同程度的抑制和杀灭作用,尤其是对霉菌的抑杀灭性能使其具有一定药用研究价值,为进一步研究和综合利用贡菜提供了实验依据。


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