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具有SOD和GPX活性的小肽设计及表达研究

伦艳妮  
【摘要】:机体中氧化-抗氧化平衡是机体内部重要的生理平衡之一。谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和超氧化物歧化酶(SOD)都属于抗氧化酶系统,它们相互协调作用,缺一不可。GPX 是在哺乳动物体内发现的第一个含硒酶,它可以消除体内的过氧化氢及脂质过氧化物,具有很大的潜在药用价值。但是天然GPX 来源有限,稳定性差,不利于大规模制备及应用。SOD 是一类金属酶,广泛分布于需氧和耐氧的生物体各组织内,按金属辅基成分的不同可以分为CuZn-SOD, Mn-SOD 和Fe-SOD.这三类SOD 都催化超氧化物自由基O2-发生歧化反应。从二十世纪八十年代起,我室分别成功地获得了具有GPX 和SOD 活性的十五肽和十七肽酶模拟物。以此为基础,我们将17 肽SOD 模拟酶的氨基端与15 肽GPX模拟酶的羧基端连接在一起,以期待获得一个同时具有SOD 和GPX 活性的双功能酶。我们将该小肽的基因连接到pGEX-2T 质粒载体中,利用pGEX-2T 融合表达系统,在E.coli BL-21 诱导进行融合表达。然后经过一系列分离纯化手段得到了目的小肽。为后期分别硒化和引入铜(Ⅱ)后,测定其GPX 和SOD 活性的研究工作开辟了道路。


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