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重组SARS-CoV S蛋白表位肽疫苗的研究

林剑萍  
【摘要】:2002~2003 年爆发流行的传染性非典型肺炎(SARS)共造成29 个国家的8098 例感染,774 例死亡,引起了广泛关注。SAR.S 相关冠状病毒(SAR.S.CoV)是SARS 的病原体。棘突蛋白(S 蛋白)是SARS—CoV 的外壳成分,为SARS-CoV 识别和结合宿主细胞的关键结构,可以诱生SAR.S.CoV 的中和抗体,因此可作为抗SARS.CoV 药物及疫苗研究的靶点。 为了研制预防SARS 疾病的疫苗,我们采用生物信息学方法对S 蛋白结构和特性做预测,选定了可能包含B 淋巴细胞表位区为168aa-216aa 肽段(S_2)和726aa.843aa 肽段(S_6)。在此基础上,构建出S_2 基因六聚体(PS_2基因)和分子伴侣10-s6融合基因(C86 基因),采用大肠杆菌高效表达了重组PS_2 和CS_6 蛋白,并用Ni2+亲合层析方法获得了纯化的重组蛋白。重组PS_2 蛋白在小鼠诱生的高滴度抗体以IgGl 为主,可识别SARS-CoV S 蛋白的S1 亚单位全长多肽(S1 多肽)和灭活的SARS—CoV。此外,重组PS_2蛋白能在体外刺激被重组PS_2蛋白免疫的小鼠脾细胞和B 淋巴细胞发生记忆性增殖并产生S1 多肽特异性抗体,促进小鼠产生IL-6,并可诱导未致敏人PBMC 增殖和B 细胞活化。结果提示,重组PS_2 蛋白可能诱生SARS-CoV 的中和抗体,因而成为一种新型的抗SARS 疫苗。


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