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应用基因芯片(Microarray)和实时监测聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测他莫昔芬和雌二醇对人类乳腺癌细胞基因表达的调控

袁霞  
【摘要】:他莫昔芬(Tamoxifen)是雌激素受体阳性的,绝经后乳腺癌患者的主要辅助治疗手段。其主要是通过与雌激素竞争雌激素受体,进而拮抗雌激素的致癌作用。同时,他莫昔芬作为抗肿瘤药物,也存在着非受体依赖机制。雌激素(Estrogen)起着调节乳腺正常组织生长的作用,但是也与乳腺癌的发生和进展密切相关。尽管其致癌机制尚不是很清楚。特别是他莫昔芬和雌激素调节基因表达以及细胞内发挥作用的旁路途径尚不明确。本课题应用包含1700 个寡聚核苷酸基因互补DNA 芯片(cDNA Microarray)技术,在体外比较他莫昔芬(TAM)和雌二醇(E2)处理乳腺癌细胞前后这些基因mRNA 量表达的变化。以量增加超过2 倍,下降低于0.5 倍为界限确定其扩增或下调,我们发现经过TAM 和E2 处理雌激素受体阳性的乳腺癌细胞系(ZR-75-1)18 小时后,分别有146 和54 个基因得以扩增或下调;而在雌激素受体阴性的乳腺癌细胞系中(MDA-MB-231),经过TAM和E2 处理18 小时后,分别有46 和80 个基因得以扩增或下调。大多数基因(90%)并不受TAM 和E2 的调节。在受他莫昔芬和雌激素调解的10%的基因中,选择一些前癌基因,抑癌基因,抗氧化酶相关基因应用实时监测PCR 技术进行定量监测。在本研究的目的如下:1,绘制TAM 和E2 对乳腺癌细胞系基因表达调控的图谱;2,分析TAM 和E2 对这两个乳腺癌细胞系基因表达的结果;3,明确细胞的功能基因,特别有助于理解TAM 和E2 对乳腺癌细胞作用的分子机制相关的基因。这是我们第一次应用基因芯片技术和实时监测PCR 技术检测他莫昔芬调节雌激素受体阳性和雌激素受体阴性的人类乳腺癌细胞中的基因表达,也是第一次应用此技术检测雌二醇调解激素受体阴性的人类乳腺癌细胞系中的基因表达。这项研究为我们研


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