收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

犬冠状病毒基因疫苗与重组腺病毒的构建、表达及免疫原性研究

乔军  
【摘要】:犬冠状病毒(Canine coronavirus, CCV)是引起幼犬发生胃肠炎的重要病原之一,不但对我国养犬业危害较大,同时也对一些野生动物构成较大的威胁。血清学调查发现,该病呈世界分布,在我国很多地区犬群中也时有流行,导致较高的发病率和死亡率。免疫接种是预防此病的有效途径之一,因此为控制该病的流行须研制安全有效的疫苗。本研究首次对犬冠状病毒大熊猫株(CCV DXMV)纤突蛋白(S)、膜蛋白(M) 和核蛋白(N) 三种主要结构蛋白基因进行了克隆、测序及遗传进化分析,并用DNAstar软件对DXMV 株与疫苗株Insavc-1 S 蛋白和M 蛋白疏水性、Jameson-Wolf 抗原表位和表面极性进行了分析。结果表明,DXMV 野毒株的基因型为CCV 基因II 型;与疫苗株Insavc-1 相比,两毒株S 蛋白在糖基化位点、疏水性、Jameson-Wolf 抗原表位上存在比较明显的差异;DXMV 株S 蛋白和M 蛋白Jameson-Wolf 抗原表位指数要显著高于Insavc-1 疫苗弱毒,从分子水平上揭示了DXMV 株免疫原性要好于Insavc-1 疫苗株的原因。以pVAX1 为载体成功构建了三种CCV 基因疫苗表达载体pVAXS1 、pVAXM 和pVAXN。将三种真核表达载体转染MDCK 细胞后,间接ELISA 和间接荧光染色试验检测结果表明,三种目的蛋白均能在MDCK 细胞中表达。基因疫苗载体在小鼠上免疫试验结果表明,pVAXS1、pVAXM 和pVAXN 均可诱导小鼠产生特异性免疫应答;其中pVAXS1+pVAXM+pVAXN 三个基因疫苗混合免疫小鼠可诱导产生较强的体液免疫和细胞免疫应答。以感染性犬2 型腺病毒全基因组为载体,首次构建了的含有CCV S1 基因的重组CAV-2-S1 病毒。Western-blotting 检测结果证实,该重组病毒能表达具有免疫学活性的重组CCV S 1 蛋白。体外传代试验表明,该重组病毒具有良好的遗传稳定性。根据基因疫苗在小鼠上的免疫试验结果,将基因疫苗pVAXS1+pVAXM+pVAXN 和重组病毒CAV-2-S1 在犬上进行了免疫试验。结果表明,两者均可诱导犬产生特异性体液免疫和细胞免疫。其中pVAXS1+pVAXM+pVAXN 与重组病毒联合免疫能诱导机体产生较高水平的体液和细胞免疫应答。以上试验研究为CCV 基因疫苗和重组腺病毒疫苗的研制奠定了良好的基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 唐冬生,夏家辉;基因药物的前沿技术[J];生物技术通报;1999年01期
2 张茂林,扈荣良,余兴龙,涂长春,钱爱东,荣爱红,刘红丽,刘思国,殷震;动物狂犬病基因疫苗的研究[J];中国预防兽医学报;2000年S1期
3 ;双价基因疫苗献礼中国畜牧业[J];宁夏科技;2001年04期
4 孙德文,詹勇,许梓荣;基因疫苗及其在猪传染病中的应用[J];兽药与饲料添加剂;2002年06期
5 陈创夫,乔军,王金富,田晶华,张高轩;传染性法氏囊病病毒VP_2基因真核细胞表达载体的构建及免疫应用研究[J];动物科学与动物医学;2001年06期
6 ;口蹄疫基因疫苗在国内研制成功[J];湖北畜牧兽医;2003年01期
7 陈同海,孙志明,赵福广,王全凯;犬细小病毒基因疫苗对幼貉的免疫试验[J];经济动物学报;2005年02期
8 袁秀芳;徐丽华;王一成;牛登元;刘邓;王朝文;;pCI-LT(R210G)基因疫苗的免疫原性研究[J];黑龙江畜牧兽医;2009年12期
9 牛东升;基因疫苗及增强其免疫效应的策略[J];生物技术通讯;2001年04期
10 刘斌忠;;基因疫苗的发展及其展望[J];当代畜禽养殖业;2010年11期
11 刘斌忠;;基因疫苗的发展及其展望[J];当代畜禽养殖业;2010年12期
12 娄华;基因免疫研究进展及其面临的问题[J];中国兽医科技;1999年12期
13 杨大光;柴丽娜;刘守川;王泽霖;;核酸疫苗研究进展[J];上海畜牧兽医通讯;2007年02期
14 钱凤芹;郭宁;;脂质体佐剂在基因疫苗中的应用[J];中国畜牧兽医;2008年01期
15 陈创夫,余兴龙,乔军,李作生,涂长春,殷震;猪瘟基因疫苗免疫小鼠外周血细胞免疫动态变化研究[J];塔里木农垦大学学报;2000年04期
16 余兴龙,涂长春,李红卫,陈创夫,李作生,马正海,孙明,殷震;猪瘟病毒E2基因真核表达质粒的构建及基因疫苗的研究[J];中国病毒学;2000年03期
17 程安春,汪铭书,希尼尼根,豆文波,陈希文,陈孝跃;猪生殖与呼吸综合征ORF5基因疫苗的构建及其安全性和免疫原性检测[J];中国兽医科技;2005年01期
18 王德忠;;口蹄疫感染性克隆疫苗的发展前景[J];吉林畜牧兽医;2006年04期
19 ;猪瘟病毒E_2基因疫苗表达抗原在小白鼠胫前肌的分布及消失[J];畜禽业;1999年09期
20 陈创夫,余兴龙,李作生,涂长春,殷震;猪瘟基因疫苗免疫小鼠体液及细胞免疫动态变化研究[J];中国免疫学杂志;2003年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 岳朝晖;刘建国;王晶;赵靖;王伟;姜晶;管晓燕;张剑;;防龋基因疫苗pcDNA3-PAc不同途径免疫BALB/c小鼠的实验研究[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
2 姜晶;刘建国;王伟;耿发云;王怡丹;白朋元;亓鹏;;防龋基因疫苗pVAX1-SG免疫SD大鼠的实验研究[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
3 王伟;刘建国;亓鹏;姜晶;田源;白朋元;管晓燕;;防龋基因疫苗pVAX1-GC免疫SD大鼠的实验研究[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
4 裴宗飞;张文娟;牛钟相;;鸭补体C3d基因cDNA的克隆及鉴定[A];中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会论文集[C];2008年
5 张文卿;徐腾飞;于红;刘颖;李丹;;Her2/neu-IL12融合基因疫苗的构建及其对小鼠乳腺癌的防治作用[A];肿瘤病因学研究与中西医结合肿瘤综合诊疗交流研讨会论文集[C];2009年
6 蒋桂花;王劲松;李国才;季明春;;NspA基因疫苗小鼠体内诱生特异性抗体的研究[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
7 徐薇;岳艳;桂俊;熊思东;;佐剂的递送与表达方式对基因疫苗诱导特异性免疫应答的作用[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
8 王怡丹;刘建国;姜晶;王伟;亓鹏;白朋元;管晓燕;;防龋基因疫苗pVAX1-SPG免疫BALB/c小鼠的实验研究[A];全国第三次牙体牙髓病学临床技术研讨会论文汇编[C];2009年
9 任晓峰;石娜;崔进;孟凡丹;李训良;李鹏冲;斯琴高娃;王超;王鑫;吴丹;李广兴;;猪IL-15对PRRSV GP5基因疫苗免疫增强作用的研究[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
10 蒋金凤;程安春;汪铭书;路立婷;;壳聚糖为递送载体的DEV gC基因疫苗诱导BALB/c小鼠体液和粘膜免疫发生的研究[A];第四届第十次全国学术研讨会暨动物微生态企业发展战略论坛论文集(下册)[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 唐翌姝;1、细菌纳米磁小体为载体的基因疫苗研究2、同种异基因白细胞联合细胞瘤苗治疗肿瘤的初步研究[D];北京协和医学院;2012年
2 王鹤;HPV58mE6E7融合基因疫苗构建及其免疫效果的研究[D];广西医科大学;2011年
3 刘莉;可示踪的防龋基因疫苗构建、表达及其基因疫苗PELA微球的研究[D];四川大学;2003年
4 杨广民;联合应用MAGE-1与IL-18基因疫苗抗肝癌免疫治疗作用的实验研究[D];吉林大学;2010年
5 范雄林;结核分枝杆菌基因疫苗的构建及其免疫学特性的初步研究[D];第四军医大学;2001年
6 门静涛;日本血吸虫复合表位基因疫苗免疫研究[D];吉林大学;2009年
7 李艳佳;HPV16E7DNA疫苗和IL-15重组质粒的联合免疫作用及对树突状细胞表面分子的表达和功能的影响[D];河北医科大学;2005年
8 鞠会艳;犬瘟热病毒基因疫苗与重组犬腺病毒的构建及其实验免疫研究[D];吉林大学;2006年
9 林华;PRRSV变异株的分离鉴定、鉴别诊断和新型基因疫苗的研究[D];四川农业大学;2010年
10 孟祥俊;HSV-1糖蛋白B基因疫苗的构建及其预防单纯疱疹病毒性眼病的初步研究[D];吉林大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 舒兵;鸭瘟病毒UL24基因疫苗的构建及其免疫效果的初步研究[D];四川农业大学;2011年
2 余霞;鸭瘟病毒UL24基因疫苗诱导鸭体液免疫及抗原动态分布的研究[D];四川农业大学;2012年
3 谢铮;人乳头瘤病毒16型E6E7基因疫苗的基础实验研究[D];扬州大学;2010年
4 沈福晓;鸭瘟病毒gC基因疫苗在雏鸭体内的抗原表达时相和分布规律[D];四川农业大学;2010年
5 王伟;免疫增效型广谱抗肿瘤血管生成基因疫苗的基础研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
6 练蓓;鸭瘟病毒gC基因部分特征分析及gC基因疫苗诱导鸭免疫发生的研究[D];四川农业大学;2011年
7 徐良;猪传染性胸膜肺炎杆菌菌影装载猪源巴氏杆菌外膜蛋白H基因疫苗的免疫效果评价[D];天津农学院;2013年
8 王浩;基因疫苗免疫治疗多发性骨髓瘤小鼠明显延长生存期[D];昆明医学院;2011年
9 由田;编码糖蛋白B的裸基因疫苗诱导单纯疱疹病毒Ⅰ型感染小鼠的体液和细胞免疫[D];延边大学;2010年
10 蒋金凤;鸭肠炎病毒gC基因疫苗诱导BALB/c小鼠免疫发生的研究[D];四川农业大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;基因疫苗防病——长期发展方向[N];中国中医药报;2000年
2 杨 骏;法试制新型艾滋病基因疫苗[N];中国高新技术产业导报;2003年
3 海文;基因疫苗临床研究新进展[N];中国医药报;2001年
4 杨骏;法试制新型艾滋病基因疫苗[N];医药经济报;2003年
5 通讯员 肖鑫;基因疫苗研制获重要进展[N];光明日报;2001年
6 记者 魏忠杰;癌症基因疫苗进入临床试验[N];新华每日电讯;2004年
7 庄愉;基因疫苗研究的第三次革命[N];医药经济报;2001年
8 张永兴;新加坡开发出预防哮喘基因疫苗[N];医药经济报;2004年
9 张建松;我国治疗性基因疫苗研究获重要突破[N];中国高新技术产业导报;2000年
10 张建松;治疗性基因疫苗研究获突破[N];医药经济报;2000年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978