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鹿茸多肽研究及IGF-15′端调控序列分析

郝林琳  
【摘要】:鹿茸肽类生长因子可作为提高机体免疫力,强健身体的药物和珍贵的保健品,是鹿产品深加工的一个方向。本试验采用酸醇法从新鲜马鹿茸中提取了活性多肽,包括IGF-1、EGF、NGF等生长因子。定量分析表明总多肽为1.78±0.23 mg/g鲜重,酸粗提物中IGF-1为14.62±0.92 ng/g,醇提多肽中IGF-1为352±58 pg/g。比较发现鹿茸顶部、中部、根部的总多肽、IGF-1、EGF、β-NGF含量从顶部到根部递减(P0.05)。 以青年或老年雄性昆明小鼠为实验对象,腹腔注射鹿茸多肽1,4,8mg/kg体重和等体积NS(对照组),连续6 d,实验组小鼠体重较对照组有增加趋势(P0.05);实验组小鼠玫瑰花环成环率、吞噬百分率显著高于对照组(P0.05),8 mg/kg组血清溶血素OD值与对照组差异显著(P0.01),证明鹿茸多肽的免疫调节作用。老年小鼠4,8 mg/kg组血清SOD活性及MDA含量与对照组差异显著(P0.05),说明鹿茸多肽对老年小鼠有抗氧化作用。小鼠负重游泳实验中,8 mg/kg组小鼠存活时间及40 min的小鼠只数与对照组差异显著(P0.05),证明鹿茸多肽的抗疲劳作用。 为探讨鹿茸顶部IGF-1高效表达的调控机制,PCR扩增获得了鹿茸IGF-1基因5′端(CCS1,074, Genbank Accession No. DQ234,266 ),生物信息学分析表明:在CCS1,074 180~310 base处存在CpG岛,在142~192、238~288、874~924、1,359~1,409 base处可能存在启动子;比较发现,HAND/HAND2_E12.01和ZF5F/ZF5.01是鹿茸IGF-1区别于其它种属IGF-1启动子区域的潜在转录因子,这些潜在转录因子与鹿茸生长的关系尚待进一步实验证实。综合分析表明CCS1,074 1~1,580 base为鹿茸IGF-1基因5′端区域,1,581~1,966 base为外显子1,1,903~1,966 base为信号肽,1,967~2,087 base为内含子1。


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