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抗菌肽在动物乳腺中的表达及对乳房炎主要病原菌的抑制效应研究

张锦霞  
【摘要】:抗菌肽作为一种新型的抗微生物制剂,除了具有广谱抗菌活性外,还有消炎、免疫调节等多种生物学功能,通过乳腺表达抗菌肽预防奶牛乳房炎不仅具有理论意义而且具有广阔的应用前景。本研究通过重叠延伸PCR法合成了天蚕素B、天蚕素A-蛙皮素杂合肽、牛乳铁蛋白肽和牛气管抗菌肽四个全长的抗菌肽基因;利用山羊β-酪蛋白调控序列和真核基因表达质粒构建了乳腺特异性表达载体,乳腺表达检测结果显示,表达载体能够指导抗菌肽在乳腺中的瞬时表达,表达的重组蛋白对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有明显的抑制作用。为了达到利用抗菌肽长期有效预防乳房炎的目的,进一步构建了上述不同抗菌肽基因的重组逆转录病毒载体,并通过转染包装细胞获得了整合有抗菌肽基因的重组逆转录病毒,该病毒悬液注射妊娠期奶牛乳腺组织后,实现了抗菌肽在产犊后奶牛乳腺中稳定地通过乳汁分泌表达,并证明了其对临床分离的乳房炎主要病原菌具有明显的抗菌活性。本研究为通过乳腺表达抗菌肽预防奶牛乳房炎奠定了基础。


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